(一)原理

利用样品经石油醚提取后，根据BHA石油醚相和含水乙醇相中分配系数的不同，使BHA转入72％乙醇相中，再与2，6一二氯醌氯亚胺的硼砂溶液作用，生成一种稳定的蓝色化合物，其颜色深浅与BHA的量成正比，于620nm处测定吸光度，与标准曲线比较定量。

(二)仪器和试剂

l.仪器

分光光度计。

2．试剂

(1)2，6一二氯醌氯亚胺乙醇溶液(O.1 g／L)：称取O.01g 2．6一二氯醌氯亚胺，溶于无水乙醇中并稀释至100mL。临用时现配，贮于棕色瓶中，置于冰箱中保存。

(2)硼砂溶液(20 g／L)。

(3)72％乙醇溶液。

(4)石油醚：沸程30～60℃。

(5)无水乙醇。

(6)BHA标准储备溶液：准确称取100mg的BHA，加少许无水乙醇溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并用无水乙醇定容。摇匀避光保存。此溶液每毫升含1mg的BHA。

(7)BHA标准使用液：临用时吸取BHA标准储备溶液，以无水乙醇稀释成每毫升含1．Oµg和50 µg的BHA。

(三)操作步骤

1．BHA标准曲线的绘制

准确吸取每毫升含1.Oµg的BHA标准使用溶液0．0、1．0、3．O、5．O、7．O、9．O mL，另吸取每毫升含5.0µg的BHA标准使用溶液3．O、4．O、5．0、6．O、7．O mL，分别置于25 mL比色管中。然后分别加入72％乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入O.1 g／L 2，6一二氯醌氯亚胺乙醇溶液1mL，充分混匀后加入硼砂缓冲溶液1mL，摇匀后静置20 min，于分光光度计620 nm处测定吸光度，并绘制标准曲线。

2．样品测定

准确称取经粉碎的样品10 g，置于150 mL带塞三角瓶中，加入石油醚50mL，于振荡器上振荡20min，静止。吸取上层清液25mL置于分液漏斗中，以72％乙醇溶液15mL、10 mL、10mL、10mL分次抽提，收集乙醇溶液层于50mL容量瓶中，并用72％乙醇溶液定容至刻度，混匀。吸取样品乙醇溶液4mL，加入72％乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入O．1 g／L 2，6一二氯醌氯亚胺乙醇溶液1mL，以下按标准曲线绘制操作，测得吸光度值，并从标准曲线上查出相应的BHA含量。

(四)结果计算

样品中的BHA含量按以下公式进行计算。

X=A/m*1000

式中：X——样品中BHA的含量，mg／kg；

A——相当于标准的量，mg；

m——测定用样品溶液相当于样品的质量，g。