(1)单向展开法

①薄层板的制备称取约3g硅胶G，加相当于硅胶量2～3倍左右的水，用力研磨1～2min至成糊状后立即倒于涂布器内，推成5cm×20cm，厚度约为0.25mm的薄层板三块。在空气中干燥约15min后，在100℃活化2h，取出，放入干燥器中保存。一般可保存2～3天，若放置时间较长，可再活化后使用。

②点样将薄层板边缘附着的吸附剂刮净，在距薄层板下端3cm的基线上用微量注射器或血色素吸管滴加样液。一块板可滴加4个点，点距边缘和点间距约为1cm，点直径约为3mm。在同一块板上滴加的大小应一致，滴加时町用吹风机用冷风边吹边加。滴加样式如下。

第一点：10pL黄曲霉毒素Bl标准使用液(0.04µg／mL)。

第二点：20µL样液。

第三点：20µl样液+10µL 0.04µg／ml黄曲霉毒素Bl标准使用液。

第四点：20µl样液+10µL O.2µg／mL黄曲霉毒素B1标准使用液。

③展开与观察 在展开槽内加10mL无水乙醚，预展12crn，取出挥干。再于另一展开槽内加lOmL丙酮三氯甲烷(8+92)，展开10～12cm，取出。在紫外线下观察结果，方法如下。

由于样液点上加滴黄曲霉毒素B-标准使用液，可使黄曲霉毒素B，标准点与样液中的黄曲霉毒素B1荧光点重叠。如样液为阴性，薄层板上的第三点中黄曲霉毒素B-为O．0004µg，可用作检查在样液内黄曲霉毒素B1最低检出量是否正常出现；如为阳性，则起定性作用。薄层板上的第四点中黄曲霉毒素B1为0.002pg，主要起定位作用。
若第二点在与黄曲霉素标准点的相应位置上无蓝紫色荧光点，表示试样中黄曲霉毒素Bl含量在5µg／kg以下；如在相应位置上有蓝紫色荧光点，则需进行确证试验。

④确证试验为了证实薄层板上样液荧光系是由黄曲霉毒素B-产生的，滴加三氟乙酸，产生黄曲霉毒素Bl的衍生物，展开后此衍生物的比移值约在O.1。于薄层板左边依次滴加两个点。

第一点：0.04µg／mL黄曲霉毒素Bl标准使用液10µL。

第二点：20µL样液。

于以上两点各加一小滴三氟乙酸盖于其上，反应5min后，用吹风机吹热风2min后，使热风吹到薄层板上的温度不高于40℃，再于薄层板上滴加以下两个点。

第三点：O.04µg／ml。黄曲霉毒素Bl标准使用液10µl。

第四点：20µL样液。

再展开，在紫外灯下观察样液是否产生与黄曲霉毒素Bl标准点相同的衍生物。未加三氟乙酸的三、四两点，可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。

⑤稀释定量样液中的黄曲霉毒素B-荧光点的荧光强度如与黄曲霉毒素B，标准点的最低检出量(O.0004µg)的荧光强度一致，则试样中黄曲霉毒素B1含量即为5µg／kg。如样液中荧光强度比最低检出量强，则根据其强度估计减少滴加微升数或将样液稀释后再滴加不同微升数，直至样液点的荧光强度与最低检出量的荧光强度一致为止。滴加式样如下：

第一点：lOµl．黄曲霉毒素Bl标准使用液(O.04µg／mL)。

第二点：根据情况滴加10µL样液。

第三点：根据情况滴加15µL样液。

第四点：根据情况滴加20µL样液。

(2)双向展开法 如用单向展开法展开后，薄层色谱由于杂质干扰掩盖了黄曲霉毒素B1的荧光强度，需采用双向展开法。薄层板先用无水乙醚作横向展开，将干扰的杂质展至样液点的一边而黄曲霉毒素B1不动，然后再用丙酮一三氯甲烷(8+92)作纵向展开，试样在黄曲霉毒素B1相应处的杂质底色大量减少，因而提高了方法灵敏度。如用双向展开中滴加两点法展开仍有杂质干扰时，则可改用滴加一点法。

①滴加两点法介绍如下。

a．点样取薄层板三块，在距下端3cm基线上滴加黄曲霉毒素B1标准使用液与样液。即在三块板的距左边缘O．8～1cm处各滴加10µL黄曲霉毒素Bl标准使用液(0.04pg／mL)，在距左边缘2．8～3cm处各滴加20µL样液，然后在第二块板的样液点上加滴10µL黄曲霉毒素B1标准使用液(O.04µg／mL)，在第三块板的样液点上加滴10µL 0.2µg／mL黄曲霉毒素Bl标准使用液。

b．展开横向展开：在展开槽内的长边置一玻璃支架，加10—ml。无水乙醇，将上述点好的薄层板靠标准点的长边置于展开槽内展开，展至板端后，取出挥干，或根据情况需要时可再重复展开1～2次。纵向展开：挥干的薄层板以丙酮一三氯甲烷(8+92)展开至10～12cm为止。丙酮与三氯甲烷的比例根据不同条件自行调节。

c.观察及评定结果 在紫外灯光下观察第一板、第二板，若第二板的第二点在黄曲霉毒素B1的相应处出现最低检出量，而第一板在与第二板的相同位置上未出现荧光点，则试样中黄曲霉毒素B1含量在5µg／kg以下。

若第一板在与第二板的相同位置上出现荧光点，则将第一板与第三板比较，看第三板上第二点与第一板上的第二点的相同位置上的荧光点是否与黄曲霉毒素B，标准点重叠，如果重叠，再进行确证试验。在具体测定中，第一、二、三板可以同时做，也可按照顺序做。如按顺序做，当在第一板出现阴性时，第三板可以省略，如第一板为阳性，则第二板可以省略，直接作第三板。

d.确证试验另取薄层板两块，于第四、第五两板距左边缘0．8～1cm处各滴加lOµl。黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04µg／mL)及1小滴三氟乙酸；在距左边缘2.8～3cm处，于第四板滴加20µl样液及1小滴三氟乙酸；于第五板滴加20µl样液、10µl。黄曲霉毒素B1标准使用液(0.04µg／mL)及1小滴三氟乙酸，反应5min后，用吹风机吹热风2min，使热风吹到薄层板上的温度不高于40℃。再用双向展开法展开后，观察样液是否产生与黄曲霉毒素B1标准点重叠的衍生物。观察时，可将第一板作为样液的衍生物空白板。如样液黄曲霉毒素Bl含量高时则将样液稀释后，按单向展开法中确证试验的方法做确证试验。

e．稀释定量如样液黄曲霉毒素B1含量高时，按单向展开法中稀释定量操作。如黄曲霉毒素B1含量低，稀释倍数小，在定量的纵向展开板上仍有杂质干扰，影响结果判断时，可将样液再做双向展开法测定，以确定含量。

②滴加一点法介绍如下。

a.点样取薄层板三块，在距下端3cm基线上滴加黄曲霉毒素B1标准使用液与样液。即在三块板距左边缘0.8-1cm处各滴加20µL样液，在第二板的点上滴加10µL黄曲霉毒素B1标准使用液(O.04µg／mL)在第三板的点上滴加10µL黄曲霉毒素Bl标准溶液(0.2µg／mL)。

b．展开 同滴加两点法的横向展开与纵向展开。

c.观察及评定结果在紫外灯下观察第一、二板，如第二板出现最低检出量的黄曲霉毒素B1标准点，而第一板与其相同位置上未出现荧光点，试样中黄曲霉毒素B1含量在5µg／kg以下。如第一板在与第二板黄曲霉毒素B1相同位置上出现荧光点，则将第一板与第三板比较，看第三板与第一板相同位置上的荧光点是否与黄曲霉毒素B1标准点重叠，如果重叠再进行以下确证试验。

d.确证试验另取两板，于距左边缘0.8～1cm处，第四板滴加20µL样液、1滴三氟乙酸；第五板滴加20µl样液、lOµl 0.04µg／mL黄曲霉毒素B1标准使用液及1滴三氟乙酸。产生衍生物及展开方法同滴加两点法中的“d．确证试验”。再将以上两板在紫外灯下观察，以确定样液点是否产生与黄曲霉毒素B1标准点重叠的衍生物，观察时可将第一板作为样液的衍生物空白板。经过以上确证试验定为阳性后，再进行稀释定量，如含黄曲霉毒素B1低，不需稀释或稀释倍数小，杂质荧光仍有严重干扰，可根据样液中黄曲霉毒素B1荧光的强度，直接用双向展开法定量。