1 范围

本标准规定了出口饮料中维生素C和咖啡因检验的抽样、制样和液相色谱侧定方法。

本标准适用于出口菊花茶饮料中维生素C、出口罐装乌龙茶饮料中维生素C和咖啡因的侧定。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过1500件为一检验批。

同一检验批的商品应具有同一的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。

2.2 抽样数量

表1

2.3 抽样方法

按表1规定的抽样件数随机抽取，逐件开启，每件至少取一雄作为原始样品，加封后标明标记，及时送实验室。

2.4 试样制备

将取得的全部原始样品倒入洁净的搪瓷混样桶内，充分搅拌混匀，再将混匀样品分装出两份(每份500mL)，密封，并标明标记，作为试样。

2.5 试样保存

将试样于41℃～5℃冷藏保存。

注：在抽样和制样的操作过程中必须防止样品受到污染和发生被测物含童变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

样品经水适当稀释后，用液相色谱法测定。以C₁₈反相柱为分离柱，萦外检测器检侧，外标法定量。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

3.2.1 乙酸。

3.2.2 甲醇。

3.2.3 乙酸铵。

3.2.4 乙酸铵溶液：0.02mol/L，称取1.542 g乙酸铵溶于水中并定容至1000mL，再用乙酸调节pH值为4.0。

3.2.5 维生素C标准品：纯度≥99.5％。

3.2.6 咖啡因标准品：纯度≥99.5％。

3.2.7 维生素C标准贮备液：准确称取适量维生素C标准品，用水溶解，配制成浓度为1 mg/mL的维生素C标准贮备液(临用时配制)。

3.2.8 咖啡因标准贮备液：准确称取适量咖啡因标准品，用水溶解，配制成浓度为1 mg/mL的咖啡因标准贮备液。

3.2.9 混合标准工作液：根据需要，吸取适量的上述维生素C标准贮备液和咖啡因标准贮备液，用水稀释成适当浓度的混合标准工作液。

3.3 仪器、设备

3.3.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。

3.3.2 超声波发生器。

3.3.3 微孔过滤器：0.45um

3.3.4 微量注射器：25 uL。

3.4 测定步骤

3.4.1 样品制备

准确移取适量样品，视样液中维生素C和咖啡因的含量高低，用水适当稀释定容(含二氧化碳的样品应先搅动或在超声波发生器上除去二氧化碳)，样液经0.45um微孔过滤器过滤后，供液相色谱测定。

3.4.2 色谱条件

a)色谱柱：150 mm×3.9mm(id)不锈钢柱；

b)固定相：C₁₈键合固定相，粒度10 um;

c)流动相：0.02mol/L 乙酸铵溶液-甲醇(75+25);

d)流速：1.0mL/min;

e)检测器波长：230nm;

f)进样体积：10 uL。

3.4.3 色谱测定

根据样液中维生素C和咖啡因的含量情况，选择峰高相近的混合标准工作液。混合标准工作液和样液中的维生素C和咖啡因的响应值均应在仪器检测线性范围内。标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，维生素C的保留时间约为1.2min,咖啡因的保留时间约为4.9min。

3.4.4 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中维生素C或咖啡因的含量：

式中：X—试样中维生素C或咖啡因含量，mg/L;

h—样液中维生素C或咖啡因的峰高，mm;

h_s—混合标准工作液中维生素C或咖啡因的峰高，mm；

c—混合标准工作液中维生素C或咖啡因的浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL;

m—所取的试样量，mL。

注：计算结果孺将空白值扣除。

4 测定低限、回收率

4.1 侧定低限

本方法测定低限：维生素C和咖啡因均为2.5 ug/mL。

4.2 回收率

菊花茶饮料中维生素C的添加浓度及其回收率的实验数据：

10 ug/mL时，回收率为87％;

20 ug/mL时，回收率为101％;

30 ug/mL时，回收率为105％。

罐装乌龙茶饮料中维生素C的添加浓度及其回收率的实验数据：

15 ug/mL时，回收率为102％;

20 ug/mL时，回收率为101％;

35 ug/mL时，回收率为100%。

罐装乌龙茶饮料中咖啡因的添加浓度及其回收率的实验数据：

20 ug/mL时，回收率为101%;

30 ug/mL时，回收率为102％;

40 ug/mL时，回收率为102％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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