3.3 仪器和设备

3.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

3.3.2 捣碎机。

3.3.3 超声波浴。

3.3.4 容量瓶：25 mL。

3.3.5 滤膜：0.45 um。

3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取捣碎的试样约2g(精确至0.1g)，或量取饮料10 mL(精确至0.1mL)置于25 mL容量瓶中，加水至近20 mL，超声提取5 min，加2.5 mL氯化铜溶液和抗坏血酸20 mg，用水定容，混匀后过0.45 um滤膜，清液立即供液相色谱测定。

3.4.2 标准工作溶液的制备

取适量标准液置于25 mL溶量瓶中，加水至近20 mL，加2.5mL氯化铜溶液和抗坏血酸20 mg，用水定容，供液相色谱测定用。

3.4.3 测定

3.4.3.1 色谱条件

a)色谱柱：ODS Hypersil 5 um，125 mm×4 mm，或相当的色谱柱；

b)流动相：水-甲醇(80+20)含有0.02 mol/L四丁基溴化铵，0.03mol/L乙酸钠缓冲液(用磷酸调节至pH=4)，0.8 mL/min;

c)检测波长：254 nm;

d)进样量：20 uL。

3.4.3.2 色谱测定

根据样液中乙二胺四乙酸含量的情况选定峰面积相近的标准工作溶液。标准溶液和样液中乙二胺四乙酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下乙二胺四乙酸的保留时间约为8.3 min。

3.4.4 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.5 确证试验

在按照3.4.1处理后的样液中加入5 mL氯化铁(Ⅲ)溶液，放置20 min后，在3.4.3.1色谱条件下进行色谱测定，如果样液中有EDTA存在，则Cu-EDTA峰消失。

3.4.6 结果计算

按公式(1)计算试样中乙二胺四乙酸的含量：

式中：X—试样中乙二胺四乙酸二钠钙的含量，mg/kg;

A—样液中乙二胺四乙酸-铜的峰面积，mm2;

A_s—标准工作液中乙二胺四乙酸-铜的峰面积，mm2;

c—标准工作液中乙二胺四乙酸(以乙二胺四乙酸二钠钙计)的浓度，ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL;

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法对罐装食品的测定低限为100 mg/kg，对饮料的测定低限为15 mg/kg。

4.2 回收率

糖水板栗中乙二胺四乙酸添加浓度及其回收率的试验数据：

在添加100 mg/kg浓度水平时，回收率为98.9%;

在添加250 mg/kg浓度水平时，回收率为95.5％;

在添加400 mg/kg浓度水平时，回收率为95.8％。

饮料中乙二胺四乙酸添加浓度及其回收率的试验数据：

在添加15 mg/kg浓度水平时，回收率为96.5％；

在添加35 mg/kg浓度水平时，回收率为96.6％;

在添加70 mg/kg浓度水平时，回收率为95.9％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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