3.3 仪器设备

3.3.1 离心机。

3.3.2 超声波浴槽。

3.3.3 旋涡振荡器。

3.3.4 旋转蒸发器。

3.3.5 恒温箱。

3.3.6 固相萃取装置。

3.3.7 pH计。

3.3.8 气相色谱-质谱仪：四极杆质谱仪，配有El源并具有选择离子功能。

3.4 测定步骤

3.4.1 提取

准确称取5.0g±0.1g动物饲料于50 mL具盖的离心管中，加入10 mL 0.2mol/L的乙酸铵缓冲溶液，均质1 min。加入10 mL乙醚，旋涡振荡提取3 min，于3500r/min离心5 min，吸取乙醚层于另一试管中。重复乙醚提取一次，合并的乙醚相在常温下用氮气吹干。加入2 mL三氯甲烷溶解残余物，旋涡振荡1 min，加入5 mL 1.0 mol/L氢氧化钠溶液，旋涡振荡1 min，于1500 r/min离心3 min，上层水相移入另一试管中一重复氢氧化钠溶液提取一次，合并氢氧化钠溶液提取液。

3.4.2 净化

合并的氢氧化钠溶液过MAX固相萃取柱，流速2mL/min，依次用5 mL 1.0mol/L氢氧化钠溶液和5 mL 0.1mol/L氢氧化钠甲醇溶液＋水(7+3)淋洗小柱，待溶液流过固相萃取柱后，在65kPa的负压下，减压抽干。加入5mL甲基叔丁醚＋甲醇(9+1，含2％甲酸)溶液洗脱，控制流速在2 mL/min,收集洗脱液。

3.4.3 衍生化

低于40℃下，用缓和氮气流将洗脱液吹至约1 mL，移入至反应瓶中。加入0.5 mL了甲基叔丁醚+甲醇(9+1，含2％甲酸)溶液洗涤一次，并入反应瓶中。在40℃下用氮气吹干，加入100uL N-O-双-(三甲基硅基)，三氟乙酰胺+三甲基氯硅烷(99+1)衍生剂，加盖密闭后于振荡器上混匀。在70℃的烘箱中加热1h。放置冷却后开盖用氮气吹干多余的溶剂。加入0.2 mL异辛烷溶解残渣，供GC-MS检测。

3.4.4 测定

3.4.4.1 气相色谱条件

a)色谱柱：弹性石英毛细管柱，HP-5MS 30m×0.25 mm(内径)，膜厚0.25 um;

b)载气：高纯氦(纯度99.99％)，流量：1.0mL/min;

c)柱温:150℃(保持0 min)，以20℃/min升温至180℃(保持10min)，以3℃/min升温至230℃(保持2 min)，再以30℃/min升温至300℃(保持1 min) ;

d)进样口温度：250℃；

e)接口温度：280℃；

f)进样模式：无分流方式，0.75min打开分流阀；

g)进样体积：1uL～2uL。

3.4.4.2 质谱条件

a)离子源温度：250℃ ;四极杆温度：100℃;

b)电离方式：EI;

c) EM电压：高于调谐电压200V;

d)溶剂延迟时间:12 min;

e)监测离子(m/z) :

—己烷雌酚:207,179,191,399。

—己烯雌酚:412,383,397,413。

—双烯雌酚110,381,395,411。

3.4.4.3 测定

3.4.4.3.1 定量测定

根据样液中被测己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。其响应值均应在仪器检测的线性范围内。以单点或多点外标法定量。标准工作溶液和样液应等体积参插进样测定。

3.4.4.3.2 定性测定

定性测定的两个依据为：(1)被测样品的色谱峰的保留时间与标准样品相一致。(2)被测样品与标准样品的质谱图相似，被测样品的监测离子的相对丰度应与标准样品一致，二者之差不大于±10％(El模式)。

在上述色谱、质谱条件下，己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚标准品的参考保留时间分别为26.6min、26.9 min和27.1min。

3.4.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

按式(1)分别计算样品中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的残留含量(计算结果需扣除空白值)：

式中：

X—试样中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的残留含量，单位为微克每千克(ug/kg);

A—样液的选择离子色谱图中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的峰面积；

c_s—标准工作液中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

A_s—标准工作液的选择离子色谱图中己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的峰面积；

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)。

m—最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。

4 测定低限和回收率

4.1 测定低限

本方法己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚的测定低限分别为3 ug/kg、5 ug/kg、5 ug/kg。

4.2 回收率

动物饲料中己烷雌酚添加浓度及其回收率：

—在3 ug/kg时，回收率为87.1％；

—在5 ug/ kg时，回收率为83.5％

—在15 ug/kg时，回收率为82.4％。

动物饲料中己烯雌酚添加浓度及其回收率：

—在3 ug/kg时，回收率为66.3％;

—在5 ug/kg时，回收率为91.8％;

—在15 ug/kg时，回收率为90.3％。

动物饲料中双烯雌酚添加浓度及其回收率：

—在3 ug/kg时，回收率为79.2％;

—在5 ug/kg时，回收率为91.5％;

—在15 ug/kg时，回收率为100.3％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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