2.3 仪器设备

2.3.1 电子天平：感量0.0001g和0.001g。

2.3.2 真空烘箱。

2.3.3 恒温水浴。

2.3.4 紫外／可见分光光度计。

2.3.5 粉碎机或相当的设备。

2.3.6 试管加热器或相当的设备。

2.3.7 离心机：转速5000r/min。

2.4 分析步骤

2.4.1 样品制备

油菜籽样品经除去杂质后，用粉碎机粉碎并通过φ1mm圆孔筛，混匀。

油菜籽饼粕样品直接用粉碎机粉碎并通过φ1mm圆孔筛，混匀。

2.4.2 灭酶和提取

称取0.2 g样品(准确到0.001g)于13 mm×100 mm具螺旋盖试管中。不加盖，将试管置于加热器中于100℃～120℃下加热灭酶1h。在试管中加入2 mL沸水，加盖混匀，再置于加热器中于100℃～120℃下提取1h。将试管取出于室温下冷却，加入2mL常温的水，混匀并在3000r/min下离心10 min。将上清液移入10 mL容量瓶内，样品再各以2 mL水提取2次。将上清液合并至同一容量瓶内，用水稀释并定容至10.0 mL，混匀。

2.4.3 水解

准确移取适量样品提取溶液(1.0 mL～5.0mL)于已制备好的层析柱(2.2.26)中，使柱排干。用3 mL Tris-HC1缓冲液沿柱壁淋洗层析柱，并使柱排干。向层析柱中加入1.0 mL黑芥子硫苷酸酶溶液，使黑芥子硫苷酸酶溶液进入柱的填充料部分，并确保使填充料的顶部仍处于酶溶液的凹液面之下。关闭活塞，在柱上加盖，置于37℃恒温水浴中水解1h。

2.4.4 洗脱

取出层析柱，用6 mL水分6次洗脱层析柱，将洗脱液收集于10.0mL容量瓶中。加入2.0mL苯酚-钨酸溶液，用水定容到10.0mL,混匀。

2.4.5 测定

将上述洗脱液移入离心管并于3 000 r/min下离心10 min。准确移取上清液1.0mL溶液于13mm×100 mm试管中，加入3.0没L葡萄糖显色溶液，加盖混匀，置于37℃恒温水浴中保温30 min,取出，冷却至室温，用紫外厂可见分光光度计在505 nm波长下测定吸光度。

2.4.6 标准曲线制作

准确移取0，0.10，0.20，0.40，0.60，1.00，1.70，2.00 mL葡萄糖储备液于10 mL容量瓶中，在每个容量瓶中加入2 mL苯酚-钨酸试剂并用水定容。分别准确移取葡萄糖标准工作溶液1.0mL于13 mm×100 mm试管。在每个试管中加入3.0 mL葡萄糖显色溶液并混匀，置于37℃恒温水浴中保温30 min。将试管取出，冷却至室温，用紫外/可见分光光度计在505 nm波长下测定吸光度。以0 mL葡萄糖管作为空白校正。用葡萄糖系列标准工作溶液的校正吸光度数值作为Y轴，对应葡萄糖系列标准工作溶液中葡萄糖的量(umol)为X轴，绘制标准曲线或计算直线回归方程。

2.4.7 空白试验

称取0.2g样品(准确到0.001g)于13 mm×100 mm具螺旋盖试管中，加入2mL、常温的水，混匀并在3000r min下离心10 min，将上清液移入10 mL容量瓶内。同样再提取三次，将上清液合并并用水稀释定容至10.0mL混匀。以下除不加黑芥子硫苷酸酶溶液酶解外，按照上述步骤2.4.3～2.4.5操作。

2.4.8 结果计算与表述

样品中硫代葡萄糖苷总量按式(1)计算：

式中：

W—样品中硫代葡萄糖苷总量，单位为微摩尔每克(umol/g);

X—由标准曲线查得或由回归方程算得测定溶液中的葡萄糖量，单位为微摩尔(umol) ;

m—样品质量．单位为克(g);

V—用于上柱样品提取液的体积，单位为毫升(mL)。

3 测定低限、添加回收率

3.1 测定低限

油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定低限为1 umol/g。

3.2 添加回收率

进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量(黑芥子硫苷酸钾)添加浓度及其回收率实验数据见表1和表2。

表1 油菜籽

表2 油菜籽饼粕

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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