1 范围

SN/T 1961的本部分规定了食品中过敏原花生成分的实时荧光PCR检测方法。

本部分适用于检测糕点、糖果、冰淇淋等食品中过敏原花生成分，其他食品可参照使用。

2 术语、定义和缩略语

2.1 术语和定义

下列术语和定义适用于SN/T 1961的本部分。

2.1.1

实时荧光PCRreal-time fluorescent, PCR

实时荧光PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR过程，最后通过荧光信号的增幅进行定性分析。

2.2 缩略语

下列缩略语适用于SN/T 1961的本部分。

2.2.1 Ct值：C : cycle, T: threshold，每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。

2.2.2 PCR: polymerase chain reaction,聚合酶链式反应，简称PCR。

2.2.3 DNA. deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸。

2.2.4 dNTP : deoxyribonucleoside triphosphate，脱氧核苷三磷酸。

2.2.5 dATP：deoxyadenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸。

2.2.6 dCTP: deoxycytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸。

2.2.7 dGTP：deoxyguanosine triphosphate，脱氧鸟苷三磷酸。

2.2.8 dTTP：deoxythymidine triphosphate，脱氧胸苷三磷酸。

2.2.9 dUTP : deoxyuridine triphosphate，脱氧尿苷三磷酸。

2.2.10 UDG: uracil DNA glycosylase，尿嘧啶DNA-糖基化酶。

2.2.11 by : base pair，碱基对。

2.2.12 Taq : Thermus aquaticu，水生栖热菌。

2.2.13 Tris:tris(hydroxymethyl) aminomethane，三(羟甲基)氨基甲烷。

2.2.14 TE：Tris-HCI、EDTA缓冲液。

3 检测方法

3.1 方法提要

食品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板进行实时荧光PCR扩增，检测食品中是否存在过敏原花生成分。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂为优级纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水。

3.2.1 CTAB缓冲液：55 mmol/L CTAB、 1400 mmol/L氯化钠(NaCl)、20 mmol/L EDTA、100 mmol/L Tris，用10 ％盐酸(HC1)调pH至8.0，121℃，20 min高压灭菌，储存于2℃～8℃备用。

3.2.2TE缓冲液：10 mmol/L Tris,150 mmol/L氯化钠(NaCl)、2 mmol/L EDTA、1％十二烷基磺酸钠，用10％HCl调pH至8.0，121℃，20 min高压灭菌，储存于2℃～8℃备用。

3.2.3 蛋白酶K(20 mg/mL)。

3.2.4 RNA酶溶液(5ug/L)。

3.2.5 Tris饱和酚。

3.2.6 酚：三氯甲烷，异戊醇(25:24:1)；三氯甲烷，异戊醇(24:1)。

3.2.7 异丙醇。

3.2.8 70％乙醇。

3.2.9 10 mmol/L Tris-HCl(pH9.0)。

3.2.10 引物：5'-GCAACAGGAGCAACAGTTCAAG-3' 5'-CGCTGTGGTGCCCTAAGG-3'

3.2.11 探针：5'(FAM)-AGCTCAGGAACTTGCCTCAACAGTGCG(Eclipse)-3'

3.2.12 Taq DNA热启动聚合酶。

3.2.13 dNTP：dATP、dTTP、dCTP、dGTP。

3.2.14 10×PCR缓冲液：200 mmol/L Tris-HCI(pH 8.4)、200 mmol/L氯化钾(KCl)、15 mmol/L氯化镁(MgCl₂)。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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