1 范围

SN/T 1961的本部分规定了食品中过敏原花生成分的酶联免疫检测方法。

本部分适用于定量检测糕点、糖果、冰淇淋等食品中的过敏原花生成分，其他食品可参照使用。

2 检测方法

2.1 方法提要

本方法的检测原理是夹心式酶联免疫吸附方法。将样品中提取出的花生蛋白质与抗体结合，加入酶标记的检测抗体，与已结合的花生蛋白质结合，结合的检测抗体与底物反应显现颜色，在酶标仪上读取吸光度，用标准对照物的吸光度作标准曲线，通过标准曲线计算出样品中过敏原花生成分的含量。

2.2 仪器设备及器具

2.2.1 天平：量程2 kg，感量0.1g。

2.2.2 均质器。

2.2.3 水浴、加热板或能保持60℃±1℃的相当热源。

2.2.4 振荡器。

2.2.5 离心机。

2.2.6 50uL～200uL可调移液器。

2.2.7 酶标仪：波长650 nm。

2.2.8 研钵及粉碎装置。

2.2.9 试剂瓶：容量1 L。

2.2.10 过敏原花生成分定量检测试剂盒。

2.2.11 洗板机。

2.3 试样制备

取试样25g，用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状。

2.4 试样提取

2.4.1 提取液的预处理：取1 L 10 mmol/L磷酸盐缓冲提取液，加盖，摇动混匀，置于水浴中，使提取液预热到60℃。

2.4.2 取5g试样(液体试样取5 mL)加到样品提取杯中，每个样品同时做两份平行样。

2.4.3 每个样品提取杯中加入1.0g花生提取添加剂、125 mL预热到60℃的提取液，盖紧杯口。

2.4.4 在60℃水浴中以150 r/min摇动提取杯15 min，之后静置5 min使部分样品沉淀。

2.4.5 取5 mL提取液于14000r/min离心5 min(或低速2500r/min离心20 min)，取上清液放至室温即可用于测试。

2.5 测试方法

2.5.1 测试前应将所有的试剂恢复至室温(18℃～30℃)。

2.5.2 取一定数量的微孔，放在微孔支架上，标记标准液和测试样的位置。

2.5.3 用移液器吸取100uL标准液和样品测试液于微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s，在微孔上覆盖封孔膜，室温(18℃～30℃)孵育10 min。

2.5.4 倒掉各微孔中的溶液，加洗涤缓冲液200 uL洗涤微孔，重复五次。将微孔倒置于吸水纸巾上，排除剩余的洗涤缓冲液。该步骤也可用洗板机进行洗涤。

2.5.5 用移液器吸取100 uL酶标记结合物到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s，在微孔上覆盖封孔膜，室温(18℃～30℃)孵育10 min。

2.5.6 重复3.5.4洗涤微孔。

2.5.7 用移液器吸取100uL底物溶液到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20 s，在微孔上覆盖封孔膜，室温(18℃～30℃ )孵育10min。

2.5.8 用移液器吸取100uL终止液到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s。

2.5.9 用酶标仪测量每个微孔在650 nm波长的吸光度(OD)。

2.6 结果计算及报告

2.6.1 数据计算：读取OD值，根据计算式(1)，计算每一标准溶液浓度的logit和1g值。

式中：

A_n＝2-OD_n；

A₀＝2-OD₀。

示例：0标准溶液的吸光度OD₀=0.072A₀=2-0.072=1.928

5.0 ug/mL标准溶液的吸光度OD_5.0=0.201  A_5.0=2-0.201=1.799

5.0 ug/mL标准溶液1g值 1g5.0=0.7

2.6.2 标准曲线绘制：以标准溶液浓度的1g值为横坐标，logit值为纵坐标，绘制标准曲线 ,每次试验均应重新绘制标准曲线。

2.6.3 计算每个样品的logit值，利用标准曲线查出样品中过敏原花生成分含量1g值B，计算样品中

过敏原花生成分的含量X(ug/mL)=10^B。或应用试剂盒配套的计算软件，输人每个检测样品的OD值可以直接得出样品中过敏原花生成分的含量X(ug/mL)。

2.6.4 如果样品的logit值高于标准溶液的logit值范围，应对样品进行稀释后重新测试，则样品中过敏原花生成分含量应为X(ug/mL)＝稀释倍数×10^B。

2.6.5 结果报告：若样品中过敏原花生成分含量大于等于2.5 ug/g(mL)，报告样品中过敏原花生成分含量为X ug/g(mL)；若样品中过敏原花生成分含量小于2.5ug/g(mL)，报告样品中过敏原花生成分为阴性[检测低限：2.5 ug/g(mL)]。

2.7 质控标准

标准曲线的相关性应R²大于0.995，否则检测无效，应重新检测。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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