5.2 试剂

5.2.1 除另有规定外，所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和DNase的分析纯或生化试剂。条件许可的情况下推荐使用优级纯试剂。试剂的选购、验收、储存应符合GB/T 27025规定。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。去离子水电阻应达到18.2Ω。

5.2.2 植物基因组DNA纯化试剂盒。

5.2.310×PCR缓冲液(不含氯化镁)。

5.2.4 氯化镁溶液：25 mmol/L。

5.2.5 dNTP溶液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP)：各2.5 mmol/L。

5.2.6 UNG酶(以dUTP代替dTTP时)。

5.2.7 Taq酶。

5.2.8 引物和探针：调味品中转基因植物成分实时荧光PCR定性检测所用引物序列和探针序列见表1。

表1 实时荧光PCR所用引物和探针序列

6 防止污染措施

防止污染措施应符合GB/T 19495.2的规定。

7 抽样和制样

抽样和制样方法应符合GB/T 19495.7和GB/T 19495.3中相关规定。

8 检测

8.1 对照设置

检测过程中应设置核酸提取空白对照、PCR扩增试剂对照、PCR扩增阴性目标DNA对照、PCR扩增阳性目标DNA对照，具体方式按照GB/T 19495.2中相关规定。

8.2 样品前处理

8.2.1 调味品中富含的盐、糖、植物色素和发酵产生的有色物质等会影响下游实验操作，应通过样品前处理尽量去除样品中的盐、糖和色素。

8.2.2 取适量样品加入50 mL离心管，加入约2倍体积的双蒸水，上下颠倒充分混匀，7200g离心5min。

8.2.3 弃去上清液，重新加入约2倍体积的双蒸水，上下颠倒混匀，7200g离心5 min。重复该操作步骤3次～5次。

8.2.4 经过数次洗涤的样品，可以进行DNA提取和纯化。

8.3 DNA提取和纯化

建议选用北京望尔生物技术有限公司《植物基因组DNA纯化试剂盒》，也可选用其他等效市售试剂盒。DNA提取和纯化过程中应设置核酸提取空白对照，具体方式按照GB/T 19495.2中相关规定。提取和纯化后的DNA溶液长期保存应储存于-20℃或低干-20℃中。

8.4DNA定量

DNA定量方法按照GB/T 19495.3中相关规定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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