3.4 测定步骤

3.4.1 提取

称取约20 g试样(精确至0.1g)于均质瓶内，加入100 mL甲醇, 1000r/min均质4 min后，将均质瓶移入离心机，4000r/min离心10 min。

3.4.2 净化

将阴离子交换柱置于中性氧化铝柱下，用移液管移20 mL提取的上清液于氧化铝柱中，使提取液经中性氧化铝和阴离子交换柱流入烧杯。用10 mL甲醇清洗中性氧化铝柱的柱壁。移去氧化铝柱和烧杯，将25 mL的比色管置于阴离子交换柱的下方，用两份10 mL的 0.6％乙酸甲醇溶液洗脱二氯二甲吡啶酚，洗提液流速：1 mL/min。用甲醇定容并混匀。
3.4.3 甲基化

用移液管移取定容的洗提液5 mL于试管(3.3.6)内，试管置于70℃水浴内，通以氮气流吹干。取出试管，加入0.2 mL甲醇水溶液(8：2)，微温使残渣溶解，冷却至室温。加1 mL重氮甲烷试剂，拧上旋盖，将试管置于70℃水浴中保温反应2 min。反应时，试管内的液面和水浴面持平。取出试管，冷却至室温。拧去旋盖，仅使管底部接触水面，直至乙醚蒸除。于除去乙醚后的试管内加5 mL去离子水和1.00 mL提取用的硝基氯苯正己烷溶液(3.2.7)，加盖，在混和器上混和1 min。取出试管，4000r/min离心3 min。所制成的上层正己烷样液供气相色谱测定。

3.4.4 测定

3.4.4.1 色谱条件

a．色谱柱：玻璃柱，2 m×2 mm(内径)，填充物为10％(m/m)DC-200硅油涂子Chromosorb WHP载体(80～100目)；

b.氮气：纯度≥99.99％, 60 mL/min ;

c.柱温：170℃；

d.进样Q温度：200℃；

e.检测器温度：300℃。

3.4.4.2 色谱测定

将样液(如有必要，可多加提取用的硝基氯苯正己烷溶液，作进一步稀释)注入气相色谱柱，进样量2 uL。在上述色谱条件下二氯二甲吡啶甲醚出峰保留时间约为2 min, 2,4-二硝基氯苯出峰保留时间约为4 min。

3.4.5 标准曲线的绘制

分别取二氯二甲吡啶酚标准工作溶液0,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6 mL于各个试管(3.3.6)内，按上述步骤(3.4.3～3.4.4)进行，但略去“定容的洗提液5 mL”。以所得各浓度二氯二甲吡啶甲醚色谱峰高和内标峰高之比，对应实际标准溶液的浓度年g/mL)绘制标准曲线。

3.4.6 回收系数R

称取三份19.9～20.1g(精确至0.1g)不含二氯二甲吡啶酚的试样，分别加入相当于0.0,0.01和0.05 ug/g的二氯二甲吡啶酚中间标准溶液(Ⅱ)(分别为0.0,0.2和1 mL)。按3.4.1～3.4.4条操作，并计算出平均回收系数R。

3.4.7 空白试验：除不称取试样外，均按上述测定步骤(3.4.1～3.4.4)进行。

3.4.8 结果计算和表述

按下式计算试样中二氯二甲吡啶酚的含量：

式中：X—鸡肉中二氯二甲吡啶酚含量，mg/kg;

R—平均回收率；

c—由标准曲线查得最终样液中二氯二甲吡啶酚的含量，ug/mL ;

V—最终样液的体积，mL ;

m—最终样液所代表的样品量，g；

二氯二甲吡啶酚含量亦可由色谱数据处理机直接求得。

注；计算结果需将空白值扣除。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法测定低限为0.005 mg/kg。

4.2 回收率

回收率实验数据：

二氯二甲吡啶酚添加浓度在0.005～0.025mg/kg范围内，回收率为65.4％～86.2%。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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