1 范围

本标准规定了出口肉及肉制品中己烯雌酚残留量检验的抽样、制样和放射免疫测定方法。

本标准适用于出口冻牛肉中己烯雌酚残留量的检验。

2 抽样和制样

2.1 检验批

以不超过2500件为一检验批。

同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

2.2 抽样数量

2.3 抽样方法

按2.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件中至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过2 kg者，则可用灭菌刀具从每件中割取不少于100 g，混合后置于清洁容器内．作为混合原始样品。混合原始样品的总量不少于2 kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

2.4 试样制备

从混合原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入绞碎机中绞碎，充分混匀，用四分法缩分至不少于500 g，均分成两份，装入清洁容器内作为试样，加封并标明标记。

2.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3 测定方法

3.1 方法提要

试样中残留的己烯雌酚，用乙醚和氢氧化钠溶液依次提取。氢氧化钠提取液经用正己烷抽去杂质并调整pH后，再用乙醚提取、蒸干，最后用甲醇-磷酸盐明胶缓冲液溶解残渣。加入己烯雌酚氚标记物及抗体，置4℃静置后加分离剂，离心，取上清液，用液体闪烁分析仪进行测定。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

3.2.1 磷酸盐缓冲溶液：pH7.2。取1.45 g磷酸氢二钠(含12个结晶水)、0.1g磷酸二氢钾(无水)、8.0g氯化钠，溶解于水中并定容至1 000 mL。

3.2.2 磷酸盐-明胶缓冲液：取1.0g明胶用磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释至1 000 mL。

3.2.3 活性炭：60目。

3.2.4 葡聚糖：G200。

3.2.5 分离剂(活性炭-葡聚糖溶液)：取100 mg葡聚糖，溶解于100 mL磷酸盐-明胶缓冲液中，然后加1g活性炭，电磁搅拌1h，置于锥形瓶中于4℃保存。临测定前用磷酸盐-明胶缓冲液稀释4倍。

3.2.6 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L。

3.2.7 无水乙醚。

3.2.8 三氯甲烷。

3.2.9 正己烷。

3.2.10 磷酸溶液：磷酸(85％)＋水(1+l)。

3.2.11 甲醇-磷酸盐-明胶缓冲液：甲醇＋磷酸盐-明胶缓冲液(1+4)。

3.2.12 2,5-二苯基噁唑。

3.2.13 1,4-双〔2'-(4'-甲基-5'-苯基噁唑)〕-苯。

3.2.14 闪烁液：取4 g 2,5-二苯基噁唑和0.2g 1,4-双〔2'-(4'-甲基-5'-苯基噁唑)〕-苯，溶于1 000 mL二甲苯中，充分混匀，置于棕色瓶内，静置3日后使用。

3.2.15 己烯雌酚标准品：纯度≥99％(USA Sigma公司提供或相当者)。

3.2.16 己烯雌酚标准贮备液：准确称取10 mg己烯雌酚标准品，置于100 mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容，作为标准贮备液(每毫升含己烯雌酚0.1mg)，密封保存。

3.2.17 己烯雌酚标准工作液：临测定前，精确移取适量的己烯雌酚标准贮备液，用甲醇-磷酸盐-明胶缓冲溶液稀释成浓度为12.5,25,50,100,200,400 pg/100 uL的标准工作液，用以制备标准曲线。

3.2.18 己烯雌酚抗体(DES-Ab)：每瓶含0.05 mL(真空冻干)DES-Ab抗血清(CENTRC DE RECH-ER ROUSSEL LICCAF制品或相当者)。

3.2.19 己烯雌酚抗体工作液：取己烯雌酚抗体1瓶加入10 mL磷酸盐缓冲溶液使其完全溶解，该工作液置4℃保存，有效期7天。

3.2.20 己烯雌酚氛标记物(³H-DES)：英国放化中心 Amersham生产，或相当者。放射性浓度为37 Mbq/mL。

3.2.21 己烯雌酚氚标记物工作液：取己烯雌酚氚标记物，置固定的试剂瓶中，加入磷酸盐缓冲液稀释至放射性浓度为5 000 cpm/100 uL的己烯雌酚氚标记物工作液。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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