1 范围

本标准规定了动物源性食品中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的气相色谱-质谱测定方法。

本标准适用于兔肉、鱼肉及猪肾中甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的检验。

2 测定方法

2.1 方法提要

样品中的甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮羟乙酸乙酯提取，提取液过C₁₈固相萃取柱，用不同比例的甲醇-水淋洗和洗脱，洗脱液吹去甲醇后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩至干，用七氟丁酸酐衍生，吹干定后，气相色谱-质谱仪选择离子检测，外标法定量。

2.2 试剂和材料

除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2.2.1 甲羟孕酮标准品，≥98％。

2.2.2 醋酸甲羟孕酮标准品，≥97％。

2.2.3 标准溶液的配制：

2.2.3.1 甲羟孕酮标准储备溶液：准确称取适量的甲羟孕酮标准品(精确至0.0001g)，用丙酮配制成浓度为0.1 mg/mL标准储备溶液。

2.2.3.2 醋酸甲羟孕酮标准储备溶液：准确称取适量的醋酸甲羟孕酮标准品(精确至0.0001g)，用丙酮配制成浓度为0.1mg/mL标准储备溶液。

2.2.3.3 甲羟孕酮和醋酸甲羟孕酮工作溶液

准确移取适当体积的甲羟孕酮标准储备溶液(2.2.3.1)和醋酸甲羟孕酮标准储备溶液(2.2.3.2),加入乙酸乙酯稀释到一定体积，混匀，备用。

2.2.4 乙酸乙酯(HPLC级)。

2.2.5 甲醇。

2.2.6 丙酮(重蒸馏)。

2.2.7 七氟丁酸酐≥98％。

2.2.8 无水硫酸钠,650℃灼烧4h，干燥器中放置备用。

2.2.9 C₁₈固相萃取柱，500 mg，3 mL：依次用5 mL甲醇、5 mL水、3 mL甲醇-水(90+10)，3 mL甲醇-水(10+90)预处理，备用。

2.2.10 甲醇-水溶液(10+90)，淋洗用。

2.2.11 甲醇-水溶液(90+10)，洗脱用。

2.3 仪器和设备

2.3.1 气相色谱-质谱联用仪。

2.3.2 高速均质器。

2.3.3 超声波清洗器。

2.3.4 氮吹仪。

2.3.5 固相萃取装置。

2.3.6 离心机。

2.3.7 具塞玻璃离心管。

2.3.8 漩涡混合器。

2.4 测定步骤

2.4.1 提取

称取5g(精确至0.01g)样品于50 mL具塞离心管中，加入5g无水硫酸钠，拌匀，加入10 mL乙酸乙酯，均质1 min，超声10 min, 2000r/min离心5 min，取上清液于20 mL离心管中。每次加入5 mL乙酸乙酯，按上述步骤提取两次，合并提取液于20 mL离心管中，50℃吹干。

2.4.2 净化

加入1 mL的甲醇-水(10+90) , 50℃加热溶解上述残渣，振荡，-18℃以下冷却5 min, 2000r/min离心5 min。小心迅速地将非脂肪层转入C₁₈固相萃取柱(2.2.9)上，用1 mL甲醇-水(10+90)洗残渣两次，-18℃以下冷却5 min，2000r/min离心5 min，非脂肪层小心迅速地转移入柱中。待液面接近柱子上部筛板时，加入1mL甲醇-水(10+90)淋洗柱子，流出液全部弃去。加入1 mL甲醇-水(90+10)于上述20 mL离心管中，加热溶解，振荡，-18℃以下冷却5 min，取出后2000r/min离心5 min，转入上述C₁₈固相萃取柱(2.2.9)中，再加入7 mL甲醇-水(90+10)，洗脱，收集全部洗脱液。将洗脱液在氮吹仪上50℃吹至0.8 mL，补充水至2 mL，每次用3 mL乙酸乙酯提取，提取3次并离心，合并提取液，在氮吹仪上用氮气流于50℃吹干。

2.4.3 衍生化

残渣加入50 uL七氟丁酸酐，200 uL丙酮,60℃衍生40 min，在氮吹仪上用氮气流于50℃吹干，正己烷定容至1 mL, GC-MS分析。

2.4.4 甲孕酮、醋酸甲孕酮衍生物标准溶液

准确吸取适用浓度的甲孕酮和醋酸甲经孕酮混合液(2.2.3.3)1mL，用氮气流于50℃吹干，按照2.4.3 进行衍生。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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