6 测定步骤

6.1 提取

6.1.1 动物组织和内脏

称取约2 g试样(精确至0.01g)于50 mL塑料离心管中，加入20 mL乙腈，用均质器以10 000 r/min均质2 min后，再以10 000 r/min离心10 min，收集上清液于125 mL分液漏斗中。残渣用20 mL乙腈再提取一次，合并上清液。加入20 mL乙腈饱和后的正己烷(4.7)，振荡10 min后，静置20 min，收集下层液体。在40℃水浴中减压浓缩至干，残留物用5 mL SPE淋洗液(4.9)溶解，超声波水浴助溶5 min后，待净化。

6.1.2 蛋和奶

称取约2g试样(精确至0.01g)于50 mL塑料离心管中，加入20 mL乙腈，用振荡器振摇提取20 min后，再以10 000 r/min离心10 min，余下操作同6.1.1。

6.2 净化

Oasis HLB固相萃取柱(4.14)依次用5 mL甲醇、5 mL水、5 mL 0.02 mol/L磷酸预淋洗后，转入5 mL样品提取液(6.1)。先用5 mL SPE淋洗液(4.9)进行淋洗，弃去；再用5 mL水进行淋洗，弃去；最后用5 mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min。洗脱液在40℃下用氮气吹干。残留物用1 mL 0.1％甲酸水溶液(4.8)溶解，涡旋1 min后，过0.2 um微孔滤膜，供仪器检测。

6.3 测定

6.3.1 液相色谱条件

6.3.1.1 色谱柱：C18,150 mm×2.1 mm(内径)，5 um，或相当者。

6.3.1.2 流动相：A：乙腈,B:0.1％甲酸水溶液(4.8)。

6.3.1.3 梯度洗脱：见表1。

表1 梯度洗脱条件

6.3.1.4 柱温：30℃。

6.3.1.5 流速：0.2 mL/min。

6.3.1.6 进样量：20 uL。

6.3.2质谱条件

6.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定

根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液，待测样液中对乙酰氨基酚、水杨酸的响应值应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液及样液(6.2)等体积参插进样测定。

6.3.4 阳性样品的确证

按照上述条件测定样品和标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准工作液一致，允许偏差小于12.5％；定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。

表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

6.4 空白试验

除不加试样外，按上述测定步骤进行。

7 结果计算和表达

试样中的残留含量，按式(1)计算：

式中：

X—试样中药物残留含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

A—样液中药物的峰面积；

A_s—标准工作溶液中药物的峰面积；

c—标准工作溶液中药物浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—样液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。

注：计算结果需将空白值扣除。

8 测定低限和回收率

8.1 测定低限

本标准的测定低限为：对乙酰氨基酚0. 000 5 mg/kg；邻乙酰水杨酸(以水杨酸计)0.01 mg/kg。

8.2 回收率

8.2.1 对乙酰氨基酚

猪肉：添加浓度0.000 5 mg/kg，回收率为86.0％～110.0％;

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为80.6％～98.4％;

添加浓度0.1 mg/ kg，回收率为81.4％～94.4％。

猪肝：添加浓度0.000 5 mg/kg，回收率为84.0％～116.0％;

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为80.6％～102.8％;

添加浓度0.1 mg/kg，回收率为81.2％～95.8％。

鸡蛋：添加浓度0.000 5 mg/kg，回收率为72.0％～102.0％;

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为82.0％～96.6％;

添加浓度0.1 mg/kg，回收率为80.3％～91.6％。

牛奶：添加浓度0.000 5 mg/kg，回收率为66.0％～90.0％；

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为81.2％～97.4％;

添加浓度0.1 mg/kg，回收率为80.3％～93.6％。

8.2.2 邻乙酰水杨酸(以水杨酸计)

猪肉：添加浓度0.01 mg/kg，回收率为82.0％～-104.0％；

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为81.6％～101.6％;

添加浓度0.2 mg/kg，回收率为80.6％～-95.9％。

猪肝：添加浓度0.01 mg/kg，回收率为80.0％～107.0％;

添加浓度0.05 mg/kg,回收率为80.4％～105.8％;

添加浓度0.2 mg/kg，回收率为83.5％～91.1％。

鸡蛋：添加浓度0.01 mg/kg，回收率为82.0％～104.0％;

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为80.8％～99.0％;

添加浓度0.2 mg/kg，回收率为81.2％～95.9％。

牛奶：添加浓度0.01 mg/kg，回收率为86.0％～109.0％;

添加浓度0.05 mg/kg，回收率为80.4％～97.8％;

添加浓度0.2 mg/kg，回收率为80.2％～94.9％。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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