1 范围

本标准规定了肉及肉制品中己烯雌酚残留量的酶联免疫测定方法。

本标准适用于鸡肉、猪肉、牛肉、羊肉、猪肉饼中己烯雌酚残留量的检测。

2 试样的制备和保存

2.1 试样的制备

从所取全部样品中取出有代表性样品约1 kg，充分搅碎，混匀，采用四分法，将样品分成两等份，装入洁净容器，加封并做标识。

2.2 试样的保存

试样放置-20℃～-18℃条件下保存。

3 测定方法

3.1 方法提要

本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应。己烯雌酚与己烯雌酚酶标记物共同竞争己烯雌酚抗体的结合位点，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，己烯雌酚浓度与吸光度值成反比，按绘制的校正曲线定量计算。

3.2 试剂和材料

除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯，或为更高级别。水为重蒸馏水。

3.2.1 己烯雌酚酶联免疫定量测定试剂盒。

3.2.2 叔丁基甲基醚：色谱纯。

3.2.3 石油醚。

3.2.4 二氯甲烷。

3.2.5 磷酸。

3.2.6 盐酸。

3.2.7 甲醇：色谱纯。

3.2.8 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·2H₂O)。

3.2.9 磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·H₂O)。

3.2.10 氯化钠。

3.2.11 三羟甲基氨基甲烷。

3.2.12 磷酸盐缓冲液(67 mmol/L,PH=7.2)：称取9.61 g磷酸氢二钠，1.79g磷酸二氢钠和8.7g氯化钠溶解于并定容至1 000 mL水中。

3.2.13 Tris缓冲液(20 mmol/L,PH=8.5)：称取2.42g三羟甲基氨基甲烷溶解于700 mL水中，加入200 mL甲醇，用5 mol/L盐酸调节pH值至8.5，加水定容至1 000 mL。

3.2.14 洗涤用磷酸盐缓冲液(20 mmol/L, PH=7.2)：称取2.85 g磷酸氢二钠，0.55g磷酸二氢钠，9g氯化钠和1 mL吐温20,溶解并定容至1 000 mL水中。

3.2.15 氢氧化钠溶液(0mol/L)：称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL水中。

3.2.16 己烯雌酚标准品：标准品纯度≥98％。

3.2.17 己烯雌酚标准品溶液的配制：准确称取适量的己烯雌酚标准品，用甲醇配制成1 mg/mL标准贮备溶液，于4℃～8℃条件下保存。

3.3 仪器和设备

3.3.1 酶标仪：波长450 nm。

3.3.2 高剪切分散器。

3.3.3 涡旋振荡器。

3.3.4 天平。

3.3.5 离心机：3 000 r/min。

3.3.6 氮气吹干仪。

3.3.7 洗板机。

3.3.8 固相萃取仪。

3.3.9 水浴锅：70℃±2℃。

3.3.10 微量加样器：20 uL, 50 uL,100 uL, 200 uL。

3.3.11 微量多通道加样器：50 uL,100 uL。

3.3.12 RIDA C₁₈，柱：100 mg，1 mL。

3.4 样品处理

3.4.1 试样提取

称取5.0g试样至离心管中，加入10 mL 67 mmol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液，均质，用8 mL叔丁基甲基醚提取3.0 g均质物，强烈振荡20 min, 3000r/min离心10 min。转移出上清液，再用8 mL叔丁基甲基醚重复提取沉淀物，将两次提取的醚相合并，70℃水浴蒸发至干。用1 mL 70％甲醇溶解干燥的残留物，用3 mL石油醚洗涤甲醇溶液，均质15 s,3000 r/min短时离心，吸除石油醚。70℃水浴蒸干甲醇溶液，用1 mL二氯甲烷溶解，用3 mL氢氧化钠(NaOH)溶液提取。用300 uL 6 mol/L磷酸中和提取液。

3.4.2 样品纯化

用RIDA C₁₈柱纯化，流速均为1d/s。用3 mL无水甲醇洗涤柱子，用2 mL 20 mmol/L pH 8.5的Tris缓冲液平衡柱。将上述中和提取液加入柱中，用2 mL 20 mmol/L pH 8.5的Tris缓冲液洗涤柱，用3 mL 40％甲醇洗涤柱子，用正压去除残留的液体并且用空气或氮气吹2 min以干燥柱子。用1 mL 80％甲醇洗脱样品，用1 mL 80％甲醇稀释洗脱液，加入2 mL蒸馏水进一步稀释，取20 uL进行分析。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。