3.5 酶联免疫测定

3.5.1 操作条件

所有操作应在室温下(20℃～25℃)进行，雌酚试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温(20℃～25℃)后方可使用。

3.5.2 测定步骤

将测定需用的微孔条插入框架(标准液、样液和空白分别作平行试验测定)，记录标准液和样液的位置。先吸取100 uL已稀释的稀释缓冲溶液至酶标板各孔内，再分别吸取25 uL雌酚标准溶液、样品溶液至各自的微孔，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，然后用封口膜密封孔条以防溶液挥发。将其置于20℃～25℃，避光孵育1h。加入75 uL已稀释的酶标记抗原至每个微孔，混匀，覆盖上封口膜，20℃～25℃避光孵育30 min。倒掉微孔中的液体，用洗涤缓冲液洗板操作12次。加入125 uL发色剂至每一微孔中，充分混匀，20℃～25℃避光孵育20 min。加入100 uL终止液至每个微孔中，充分混匀，在30 min内，测量并记录每个微孔溶液450 nm波长的吸光度值。

3.5.3 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

3.5.4 监控试验

每次测定均应做一个添加雌酚标准的样品，添加浓度为相应产品的检测限量。

3.6 结果表述

按式(1)计算百分比吸光度值：

式中：

B_{标准/样品}—标准品或样品微孔的平均吸光度值，％；

B_空白—空白孔的平均吸光度值；

B₀—零标准的平均吸光度值。

以百分比吸光度值(算术级)为纵坐标，以雌酚标准溶液的浓度(ng/mL)对数级)为横坐标，绘制出雌酚标准液百分比吸光度值与雌酚浓度的校正曲线。每次试验均应重新绘制校正曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的雌酚浓度后，结果按

(2)进行计算：

式中：

X—样品中雌酚的残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c—从标准工作曲线上得到的样品中雌酚浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—样品溶液的最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—样品溶液所代表的最终试样质量，单位为克(g)。

也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算，所得结果表示至一位小数。

4 检测限

本方法的检出限己烷雌酚为0.5 ug/kg，己烯雌酚为1.0 ug/kg。

5 确证试验

如被测样品中己烷雌酚、己烯雌酚残留量的值大于检测限时，应用仪器方法进行确证。

相关链接：动物源性食品中二苯乙烯类激素残留量检测方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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