1 范围

本标准规定了动物源性食品中七种磺胺类药物残留量的酶联免疫吸附测定方法。

本标准适用于猪肉、鸡肉、猪肝、鸡蛋、鱼、牛奶中七种磺胺类药物残留量的筛选检测。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。

3 测定方法

3.1 方法提要

用提取液提取样品中磺胺类药物，用竞争性酶联免疫吸附法进行检测。

3.2 试剂和材料

除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.2.1 磺胺类药物酶联免疫吸附测定试剂盒。

3.2.2 丙酮。

3.2.3 乙醇。

3.2.4 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)。

3.2.5 磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)。

3.2.6 氯化钠。

3.2.7 掩蔽剂稀释液：0.5％牛血清白蛋白，1％牛血清白蛋白，于使用时配制。

3.2.8 标准品：磺胺二甲异噁唑、磺胺噻唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺吡啶、磺胺甲二唑、磺胺氯达嗪(英文名称分别为：sulfisozole、sulfathiazole、sufameter、sulfamethoxypyridazine、sulfapyridine、sulfamethizole、sulfachlorpyridazine; CAS代码：127-69-5、72-14-0、651-06-9、80-35-3、144-83-2、144-82-1、80-32-0)：纯度大于等于99%。

3.2.9 标准品贮备液：配制成10 mg/L甲醇贮备液，-20℃保存，有效期3个月。

低温保存试剂，放置于室温不要超过4h，使用时，各溶液应达到室温。

3.3 仪器和设备

3.3.1 粉碎机。

3.3.2 均质器。

3.3.3 天平(精确到0. 001g)。

3.3.4 旋涡混合器。

3.3.5 离心机(转速4 000 r/min)。

3.3.6 旋转蒸发仪。

3.3.7 酶标仪(测定波长450 nm)。

3.3.8 洗板机。

3.3.9 单道微量加样器：20 uL,100 uL, 200 uL。

3.3.10 多通道微量加样器：200 uL。

3.4 试样制备

取样品约500 g，将其切碎后，经捣碎，混匀，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样，密封，并标明标记。

3.5 试样保存

将试样于-18℃以下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3.6 提取

3.6.1 猪肉、鸡肉、鱼

称取4g(精确到0.01g)均质样品到玻璃瓶中，加入20 mL磷酸盐缓冲液，均质，剧烈混匀2 min,离心(25℃ , 4 000 r/min,10 min)，上清液用磷酸盐缓冲液稀释4倍后进行测定。猪肉、鸡肉提取液用磷酸盐缓冲液稀释；鱼肉提取液用1％牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液稀释。

3.6.2 蛋类

称取4g(精确到0.01g)均质样品到玻璃瓶中，加入20 mL磷酸盐缓冲液，轻摇30 min，避免乳化，吸取50uL混匀后的溶液用磷酸盐缓冲液稀释4倍后进行测定。

3.6.3 猪肝

称取2g(精确到0.01g)均质样品样品到玻璃瓶中，加入20 mL乙醇，均质，剧烈混匀2 min，离心(25℃,4000r/min,10 min)，吸取10 mL上清液于50 mL旋蒸瓶中，35℃减压浓缩至干，残留物用10 mL磷酸盐缓冲液溶解，滤纸过滤，吸取50 uL滤液用0.5％牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液稀释2倍后进行测定。

3.6.4 牛奶

量取20 mL(精确到0.1 mL)牛奶样品到离心瓶中，离心(25℃, 3000r/min,10 min)，除去上层脂肪后，加入20 mL丙酮，手摇混匀，离心(25℃, 3000r/min,10 min)，吸取50 uL上清液用磷酸盐缓冲液稀释20倍后进行测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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