7.3 测定步骤

7.3.1 将测定需用的微孔板备齐并插入微孔架上，记录标准品及样品等在微孔架上的位置。

7.3.2 吸取20 uL地塞米松标准溶液(浓度分别为：0、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0 ng/mL)于孔A1、A2-H1、H2；吸取20 uL样品溶液于其余微孔中。

7.3.3 分别吸取100 uL地塞米松酶标记物溶液于每一个微孔。

7.3.4 用封口膜封孔条，并持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀。

7.3.5 室温(20℃～24℃)下避光孵育30 min。

7.3.6 倒出孔中的液体，将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打，以除去孔中过多的残液，然后，立即用洗涤缓冲液按7.2.2条件进行洗板。

7.3.7 迅速加入150uL显色液于每一个微孔底部，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，于20℃～24℃避光孵育10 min。

7.3.8 迅速加入150 uL反应终止液于每一个微孔，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，将微孔架置于酶标仪中，在450 nm处测量吸光度(加入反应终止液后应在30 min内读取吸光度)。

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一标准溶液、同一样品溶液均应进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

7.6 监控试验

每批试剂盒测定前均应分别做添加地塞米松、倍他米松、氟羟泼尼松龙和双氟美松标准品的样品，添加浓度为相应产品的检测低限。

8 结果计算与表述

吸光度的百分比值为标准品和样品的OD平均值除以零标准(A1、A2)的平均OD值，再乘以100,零标准为100％(最大吸光度值)。

以吸光度的百分比值为纵坐标(％)，地塞米松标准溶液浓度(ng/mL)的对数值为横坐标，绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的残留物浓度后，地塞米松、倍他米松和氟羟泼尼松龙的结果按式(1)进行计算：

式中：

X—样品中残留物的残留总量，单位为微克每千克(ug/kg)

c—从标准工作曲线上得到的样品中残留物浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—样品溶液的最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

m—样品溶液所代表的最终试样质量，单位为克(g)。

注：也可以用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表示至一位小数。

9 确证试验

如被测样品中残留物的残留量大于限量要求时，应用其他方法进行确证。

10 测定低限和回收率

10.1 测定低限

地塞米松、倍他米松和氟羟泼尼松龙为0.3 ug/kg。

双氟美松为1.5 ug/kg。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。