1 范围

本标准规定了动物源性食品中17a-羟孕酮、烯丙孕素、炔诺孕酮、炔诺酮、美仑孕酮、甲地孕酮、孕酮、甲羟孕酮、氯地孕酮等九种孕激素类药物残留量的制样、液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。

本标准适用于内脏、肌肉、水产品、蜂蜜及牛奶等动物源性食品中17 a-羟孕酮、烯丙孕素、炔诺孕酮、炔诺酮、美仑孕酮、甲地孕酮、孕酮、甲羟孕酮、氯地孕酮等九种孕激素类药物残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/ T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法

3 样品制备与保存

3.1 制样要求

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

3.2 动物肌肉、内脏和水产品

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

3.3 牛奶、蜂蜜样品

从所取全部样品中取出有代表性样品500 g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

4 方法提要

试样中加入适量乙酸铵缓冲液经酶解后，用乙腈提取样品中九种孕激素类残留，正己烷-二氯甲烷脱脂，固相萃取柱净化，浓缩，高效液相色谱/串联质谱测定，内标法定量。

5 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-1992规定的一级水。

5.1 乙腈，色谱级。

5.2 正己烷，色谱级。

5.3 二氯甲烷，色谱级。

5.4 甲醇，色谱级。

5.5 冰乙酸，色谱级。

5.6 正丙醇，色谱级。

5.7 乙酸铵。

5.8 β-葡糖苷硫酸酯酶。

5.9 乙酸铵缓冲溶液：溶解11.6 g乙酸铵(5.7)于980 mL水中，用冰乙酸调节溶液pH值到5.2，最后用水稀释至1L。

5.10 正己烷-二氯甲烷溶液：取正己烷(5.2) 80 mL，二氯甲烷(5.3) 20 mL，混合后振摇混匀。

5.11 C₁₈ SPE柱：500 mg, 3 mL，或相当者，使用前依次用5 mL甲醇，5 mL水活化。

5.12 标准物质：17a-羟孕酮、烯丙孕素、炔诺孕酮、醋酸炔诺酮、醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮、孕酮、醋酸甲羟孕酮、氯地孕酮,17 a-羟孕酮-D8、孕酮-D9标准品：纯度≥95％。

5.13 标准溶液：

5.13.1 标准储备溶液：分别准确称取适量九种孕激素相应化合物标准品(5.12)，用乙腈溶解定容至100 mL，得质量浓度分别为1000 ug/mL的标准储备溶液。此储备液可在-20℃以下避光存放6个月。

5.13.2 混合标准中间液：准确吸取各种孕激素类标准储备液(5.13.1)适量，用乙腈准确稀释到各种孕激素类药物的浓度为100 ug/L，此中间液可在-20℃以下避光存放3个月。

5.13.3 氘代内标储备溶液：分别准确称取适量17a-羟孕酮-D8、孕酮-D9标准品(5.12)，分别用乙腈准确溶解并稀释至溶液浓度为1 000 ug/mL。此储备液可在-20℃以下避光存放6个月。临用前根据需要用乙腈稀释至适当浓度，作为混合标准内标工作液，-20℃冰箱保存。

5.13.4 混合氘代内标中间液：准确吸取各种孕激素氘代内标储备液(5.13.3)适量于棕色容量瓶中，用乙腈准确稀释至各种孕激素氘代内标物的浓度为100 ug/L，此中间液可在-20℃以下避光存放3个月。

5.13.5 混合标准工作液：混合标准工作液根据需要使用前用空白样品基质溶液配制。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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