6 测定步骤

6.1 提取和净化

称取混匀的蜂王浆样品2g(精确至0.01g)于50 mL具盖塑料离心管中，分别加入200uL，混合同位素内标溶液(3.14.6), 25 mL～0.2 mol/L盐酸溶液和100 uL 2-NBA衍生剂(3.10)，混匀后放入37℃±2℃烘箱内，避光放置过夜。加1.0 mL 50％三氯乙酸，轻轻混匀后，4 000 r/min离心5 min，将上清液过滤。滤液用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH 7.5±0.2，过经预淋洗的HLB小柱(3.15)，再加10 mL 水清洗HLB小柱，用10 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液，40℃以下真空浓缩至干后，用1.0 mL0.2％乙酸-乙腈(7+3，体积比)(3.13)溶解残渣，过0.45 um的滤膜，滤液供液相色谱串联质谱测定。

6.2 测定

6.2.1 液相色谱串联质谱条件

a)色谱柱：C₈ 150 mm×5 mm, 5 um或相当者；

b)流动相梯度洗脱条件见表1;

c)流速300 uL/min;

d)进样量：30uL；

e)离子源：电喷雾离子源；

f)扫描方式：正离子扫描；

g)检测方式：多反应监测(MRM);

h)分辨率：单位分辨；

表1 梯度洗脱条件

6.2.2 液相色谱/串联质谱测定

根据试样中被测样液的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在校正曲线线性响应范围内，如果超出，应稀释。

6.2.3 定性测定

按照上述条件测定样品和标准工作溶液，如果样品的质量色谱峰保留时间与标准品一致，允许偏差小于±2.5％；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

6.2.4 定量测定

按照内标法进行定量计算。

6.2.5 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

7 结果计算和表述

用色谱数据处理机或用式(1)计算试样中硝基呋喃代谢物残留含量：

式中：

X—试样中被测组分的残留量；

c'₀—样品溶液中内标物的浓度；

A_i—样品溶液中待测组分的峰面积；

A'₀—样品溶液中内标物峰面积；

c_is—标准溶液的浓度；

c₀—标准溶液中内标物的浓度；

A_is—标准溶液峰面积；

A₀—标准溶液中内标物峰面积；

V—样品溶液最终定容的体积；

m_i—样品溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。

8 测定低限、回收率

8.1 测定低限

硝基呋喃类代谢物残留测定低限均为0.5 ug/kg。

8.2 回收率

在蜂王浆样品中添加硝基呋喃类代谢物浓度在0.5 ug/kg、1.0ug/kg、2.0 ug/kg时，回收率见表3。

表3 蜂王浆中硝基呋喃类代谢物测定回收率范围

相关链接：进出口蜂王浆中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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