1 范围

本标准规定了动物食品中秋水仙碱残留量检测的制样和液相色谱-质谱/质谱测定方法。

本标准适用于鱼、鸭肉、牛肉、牛肝、牛肾和牛奶中秋水仙碱残留量的检测。

2 方法提要

在磷酸盐缓冲溶液(pH8)条件下，用二氯甲烷提取样品中秋水仙碱，再用C₁₈固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱测定和确证，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所有试制均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 乙腈：高效液相色谱级。

3.2 正己烷：高效液相色谱级。

3.3 二氯甲烷：高效液相色谱级。

3.4 甲醇：高效液相色谱级。

3.5 甲酸：高效液相色谱级。

3.6 磷酸二氢钠。

3.7 氢氧化钠。

3.8 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

3.9 甲醇水溶液：甲醇-水(4+6，体积比)。

3.10 0.15％甲酸溶液：移取0.15 mL用水稀释至100 mL。

3.11 磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8 g磷酸二氢钠于 950 mL水中，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值到8.0，最后用水稀释至1L。

3.12 秋水仙碱标准品(colchicine, CAS号为64-86-81 C₂₂H₂₅NO₆)：纯度大于等于95%。

3.13 秋水仙碱标准储备溶液：称取适量标准品(3.12)，用甲醇溶解，溶液浓度为100 ug/mL。-18℃避光冷冻保存。有效期1个月。

3.14 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成适当浓度的秋水仙碱标准溶液。临用前配置。

3.15 无水硫酸钠柱：80 mm×40 mm(内径)筒形漏斗，底部垫5 mm脱脂棉，再装40 mm无水硫酸钠。

3.16 固相萃取柱：C₁₈, 500 mg, 3 mL或相当者；使用前用5 mL甲醇和5 mL水预洗，保持柱体湿润。

3.17 有机相微孔滤膜：0.45 um。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。

4.2 旋转蒸发器。

4.3 粉碎机。

4.4 均质器。

4.5 旋涡混合器。

4.6 离心机：4 000r/min。

4.7 氮吹仪。

4.8 固相萃取装置。

5 试样制备与保存

5.1 牛奶：从所取全部样品中取出有代表性样品约250 mL，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于0℃～4℃保存。

5.2 鱼、鸭肉、牛肉、牛肝和牛肾：从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，用粉碎机粉碎，混合均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于-18℃冷冻保存。
在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

6.1.1 鱼、鸭肉、牛肉、牛肝和牛肾

称取2g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞塑料离心管中，加入2 mL磷酸盐缓冲溶液(3.11),加入25 mL二氯甲烷，在均质器中以14000r/min均质30 s，以4000r/min离心5 min，将上层二氯甲烷提取液过无水硫酸柱，滤液收集于浓缩瓶中，样品残渣再加入20 mL二氯甲烷，重复上述操作，合并二氯甲烷提取液，在50℃以下水浴减压浓缩至近千，用4 mL正己烷和4 mL水依次将残渣转移至10mL具塞玻璃离心管中，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1 min，以2000r/min离心3 min，弃去上层正己烷溶液，再加入4 mL正己烷，重复上述操作，下层溶液待净化。

6.1.2 牛奶

称取4g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞塑料离心管中，加甲醇至20 mL,以4000r/min离心5 min，取10.0 mL上清液加水至25 mL，加20 mL正己烷，于旋涡混合器上以2000 r/min,混匀1 min，以4000 r/min离心3 min，弃去上层正己烷溶液，下层溶液待净化。

6.2 净化

将下层溶液转移至C₁₈固相萃取柱(3.16)，再用5 mL水洗涤两次，洗涤液过C₁₈固相萃取柱，弃去流出液，再用5 mL甲醇水溶液(3.9)洗涤，负压抽干，6 mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在50℃以下水浴减压浓缩至近干，用2.0 mL甲醇-水(1+1，体积比)定容，混匀，将溶液通过0.45 um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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