1 范围

本标准规定了进出口动物源性食品中硫普罗宁及其代谢物2-巯基丙酸残留量测定的液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于进出口牛肉、牛奶，牛肝及牛肾中硫普罗宁及其代谢物2-巯基丙酸残留的测定和确证。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 方法提要

试样中残留的硫普罗宁及其代谢物在三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸二钠(Tris-EDTA)缓冲体系中用丙烯酸甲酯衍生化，调节pH值后，用乙酸乙酯提取，再经阴离子固相萃取小柱净化，用液相色谱-串联质谱进行定量和确证，外标法定量。

4 试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲酸：HPLC级。

4.2 甲醇：HPLC级。

4.3 乙腈。

4.4 乙酸乙酯。

4.5 盐酸。

4.6 三氯乙酸。

4.7 三羟甲基氨基甲烷(Tris)：生化试剂。

4.8 丙烯酸甲酯。

4.9 二水合乙二胺四乙酸二钠(EDTA)。

4.10 1mol/L盐酸溶液：量取40 mL浓盐酸，用水稀释至500 mL。

4.11 7％丙烯酸甲酯乙腈溶液：量取7 mL丙烯酸甲酯加入93 mL乙腈中混匀。

4.12 5％甲酸甲醇溶液：量取5 mL甲酸加入95 mL甲醇中混匀。

4.13 40％甲醇水溶液：量取40 mL甲醇加入60 mL水中混匀。

4.14 Tris-EDTA缓冲溶液：称取6 g Tris和0.93g EDTA溶于400 mL水中，用1 mol/L盐酸(4.10)调pH到9.1后稀释至500 mL。

4.15 20％三氯乙酸溶液：称取20g三氯乙酸加入80 mL水中溶解混匀。

4.16 阴离子交换萃取小柱：混合型阴离子交换填料(MAX),60mg/3mL或相当者。

4.17 硫普罗宁(CAS号：1953-02-2，分子式：C₅H₉NO₃S)标准品，纯度大于等于99.0％。

4.18 2-巯基丙酸(CAS号：79-42-5，分子式：C₃H₆O₂S)标准品，纯度大于等于99.0％。

4.19 标准储备液：准确称取适量的硫普罗宁及其代谢物，分别用甲醇分别配制成1 mg/mL的标准储备液，-20℃避光保存。再用乙腈稀释配制1.0 ug/mL的混合标准溶液，4℃避光保存。有效期1个月。

4.20 空白样品提取液：用不含硫普罗宁及其代谢物的样品，按照7.1和7.2制备空白样品溶液。

4.21 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成10 ng/mL，20 ng/mL。50 ng/mL、100ng/mL、200 ng/mL的混合标准工作溶液，现配。

4.22 滤膜：0. 45 um，有机相。

5 仪器和设备

5.1 液相色谱-质谱/质谱联用仪，配有电喷雾(ESI)源。

5.2 分析天平：感量0.1mg，0.01g。

5.3 涡旋混合器。

5.4 离心机：5 000 r/min。

5.5 无油真空泵。

5.6 旋转蒸发仪。

5.7 固相萃取装置。

5.8 高速均质器。

5.9 氮气吹干仪。

5.10 超声波发生器。

6 试样制备和保存

牛肉、牛肝和牛肾取样品中有代表性的约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

牛奶：取有代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于-4℃冰箱内保存。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

称取2g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管中，加入10 mL Tris-EDTA缓冲液(4.14)，再加入0.4 mL 7％丙烯酸甲酯乙腈(4.11)溶液，涡旋30 s，室温超声30 min。加入1 mL 20％三氯乙酸水溶液(4.15)，混匀后加入10 mL乙酸乙酯(4.4)，涡旋1 min，离心5 min(4000r/min)，将上清液转移到50 mL离心管中，用10 mL乙酸乙酯(4.4)重复提取一次，合并上清液。在40℃减压旋转蒸发至干。

7.2 净化

依次用3 mL甲醇活化，3 mL水平衡阴离子固相萃取小柱(4.16)。用6 mL Tris-EDTA(4.14)分三次(每次2 mL)涡旋振荡溶解7.1提取液残留物，并依次过柱，控制固相萃取柱上样流速约为1.0 mL/min，依次用3 mL 水、3 mL甲醇淋洗固相萃取柱，弃去上述滤液。用3 mL 甲酸甲醇溶液(4.12)洗脱，洗脱流速约为1 mL/min，收集洗脱液，在40℃氮气吹干，用1.0 mL甲醇水溶液(4.13)定容，充分振荡溶解残渣，用0.45 um滤膜过滤，待测。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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