1 范围

本标准规定了动物源性食品中氮氨菲啶残留量的制样和液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于牛肉、牛肝、牛肾、牛脂肪、羊肝、鸡肝、鱼肉及牛奶中氮氨菲啶残留量的测定和确证。

2 方法提要

试样中的氮氨菲啶用乙腈和甲酸铵甲醇混合溶液提取，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定量。

3 试剂和材料

所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 甲醇：高效液相色谱级。

3.2 甲酸：高效液相色谱级。

3.3 乙腈：高效液相色谱级。

3.4 正己烷。

3.5 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

3.6 甲酸铵：优级纯或相当者。

3.7 甲酸铵-甲醇溶液(0.25 mol/L)：称取15.8g甲酸铵溶于1000mL甲醇(3.1)中。

3.8 80％甲醇溶液：取甲醇(3.1)800mL，加水稀释至1000mL,混匀。

3.9 提取液：取乙腈(3.3)和甲酸铵-甲醇溶液(3.7)进行1:1混合(体积比)。

3.10 氮氨菲陡盐酸盐(Isometamidium Chloride,CAS号：34301-55-8，分子式：C₂₃H₂₆CIN₇)标准品：纯度大于或等于97.0％。

3.11 氮氨菲啶标准储备液：准确称取适量氮氨菲啶盐酸盐标准品，用甲醇配制成氮氨菲啶浓度为100 ug/mL的标准储备液。此溶液在0℃～4℃避光保存，可使用3个月。

3.12 标准工作溶液；根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成5.0 ng/mL、10ng/mL、20.0 ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL的标准工作溶液。置于0℃～4℃避光保存，可使用3天。

3.13 0.22 um微孔滤膜，有机系。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。

4.2 天平：感量为0.01g和0.0001g。

4.3 超声波清洗器。

4.4 旋涡混匀器．

4.5 氮吹仪。

4.6 离心机：5000r/min。

4.7 均质器：10000r/min。

4.8 容量瓶：100 mL、50 mL、10 mL。

4.9 具塞塑料离心管：50 mL。

5 试样的制备与保存

肌肉、内脏和鱼：取有代表性样约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于-18℃冰箱内保存。

奶：取有代表性样品约500 g,搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于4℃冰箱内保存。

制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取与净化

6.1.1 肌肉、内脏(肝脏、肾脏)、脂肪及鱼肉

准确称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL具塞离心管中，加入2g无水硫酸钠混匀，再加入20 mL提取液(3.9)，用均质器均质2 min, 4000r/min离心3 min，将有机相转移至50 mL容量瓶中，残渣再用2×10 mL提取液(3.9)均质提取。离心合并有机相，用提取液(3.9)定容至50 mL混匀后取2.00 mL用氮吹仪在35℃下浓缩至干。定量加入2.00 mL 80％甲醇溶液(3.8)溶解残渣，加入2 mL正己烷(3.4)旋涡混匀2 min后，2500r/min离心3 min，将下层过0.22 um滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

6.1.2 奶

准确称取5g试样(精确到0.01g)于50 mL具塞离心管中，加入20 mL提取液(3.9)，盖上盖混匀，超声提取15 min，冷却后将有机相过滤转移至50 mL容量瓶中，残渣再用2×10 mL提取液(3.9)超声提取，离心合并有机相。接下来按照6.1.1中“离心合并有机相”后的步骤进行。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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