7 测定步骤

7.1 提取

肌肉样品、禽蛋样品称取5g(精确至0.01g)，肾脏、肝脏样品称取2.5g(精确至0.01g)于50 mL离心管中，加入50uL，内标工作液(4.14),涡旋混合30 s后，加入25 mL乙酸乙酯和5g无水硫酸钠，以10000r/min均质提取1 min, 3000 r/min转速离心10 min。然后禽蛋样品准确分取10 mL提取液，肌肉、肾脏、肝脏样品分取5 mL提取液于15 mL的玻璃管中，45℃下氮气吹干。用乙酸乙酯-环己烷(4.7)溶解残渣并定容至10 mL，待GPC净化。

7.2 净化

7.2.1 凝胶渗透色谱条件

a)净化柱：22 g S-X3 Bio-Beads填料，200 mm×20 mm(内径)，或相当者；

b)流动相：乙酸乙酯-环己烷(50+50，体积比)，流速：5.0 mL/min；

c)进样量：5 mL；

d)净化程序：弃去7.5 mL以前的洗脱液，收集7.5 min～12.5 min的洗脱液。

7.2.2 净化过程

按上述的条件进行GPC净化。净化后将收集的洗脱液蒸干，用1 mL甲醇-水(4.8)溶解残渣，涡漩振荡，过0.45 um滤膜，供HPLC-MS/ MS分析。

7.3 高效液相色谱-串联质谱测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：C₁₈,150 mm×2.1mm(内径)，5 um，或相当者；

b)流动相：0.1％乙酸水溶液-乙腈(45+55，体积比)；

c)流速：200 uL/min;

d)色谱柱温度：30℃；

e)进样量：10uL。

7.3.2 质谱条件

a)离子化模式：电喷雾负离子扫描模式(ESI-);

b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM);

7.3.3 测定

7.3.3.1 定量测定

根据样液中被测物的含量情况，选定响应值相近的混合标准工作液。标准工作溶液和样液中分析物的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。在上述仪器条件下，各分析物的参考保留时间为：妥曲珠利亚砜4.73 min、妥曲珠利砜7.81 min、地克珠利11.02 min,氘代妥曲珠利13.53 min、妥曲珠利13.61 min；

7.3.3.2 定性测定

地克珠利和妥曲珠利亚砜有两组离子对，能够定性分析。在相同实验条件下，在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现。经对比所选离子对的丰度比与标准品离子对的丰度比，其值在允差范围内(允差范围值参见表1)，则可判断样品中存在对应的被测物。

表1定性确证时相对离子丰度的最大允许误差

7.4 空白实验

除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

8 结果计算和表述

试样中的残留含量，按式(1)计算：

式中：

X—试样中待测组分残留量，单位为微克每千克(ug/kg) ;

c_s—标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

A—样品中被测组分峰面积；

A_s—混合标准工作溶液中被测组分的峰面积；

c_i—样液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

c_si—标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

A_si—标准工作溶液中内标物的峰面积；

Ai—样液中内标物的峰面积；

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—样品的重量，单位为克(g)。

9 测定低限、回收率

9.1 测定低限

本方法的测定低限：肾脏、肝脏为20 ug/kg；肌肉为10 ug/kg;禽蛋为1 ug/kg。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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