1 范围

本标准规定了动物源性食品中二甲氧苄氨嘧啶(简称：DVD)、三甲氧苄氨嘧啶(简称：TMP)、二甲氧甲基苄氨嘧啶(简称：OMP)三种磺胺类增效剂残留量的制样和液相色谱-质谱/质谱检测方法。

本标准适用于肌肉(猪肉、鸡肉)、内脏(猪肝、牛肾、鸡肝)、牛脂肪、鸡蛋、鱼肉、牛奶及蜂产品(蜂蜜和王浆)中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶三种磺胺增效剂残留量的测定和确证。

2 方法提要

试样中的磺胺增效剂用三乙胺-乙腈混合提取液或三氯乙酸-乙腈溶液提取，提取液经反相阳离子混合固相萃取柱净化、浓缩和脱脂后，用液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法峰面积定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 三氯乙酸。

3.2 浓氨水(28％)。

3.3 三乙胺。

3.4 乙腈：色谱纯。

3.5 甲醇：色谱纯。

3.6 正己烷：色谱纯。

3.7 甲酸：色谱纯。

3.8 甲酸铵：优级纯。

3.9 无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。

3.10 乙腈饱和的正己烷：正己烷中加入乙腈饱和。

3.11 0.2％甲酸溶液：取2 mL甲酸，用水稀释至1 000 mL。

3.12 5氨水-甲醇溶液：取50 mL浓氨水，用甲醇稀释至1 000 mL。

3.13 乙腈-水溶液：取80 mL水，用乙腈稀释至100 mL。

3.14 10％三氯乙酸溶液：称取100 g三氯乙酸，用水稀释至1 000 mL。

3.15 三乙胺-乙腈混合提取液：取适量三乙胺和乙腈，按1+99(体积比)混合备用。

3.16 10％三氯乙酸-乙腈混合提取液：移取适量10％三氯乙酸溶液(3.14)和乙腈按7+3(体积比)混合备用。

3.17 二甲氧苄氨嘧啶(Diaveridine, CAS号：5355-16-8，分子式：C₁₃H₁₆N₄O₂)标准品：纯度大于或等于99.0％。

3.18 三甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim, CAS号：738-70-5，分子式：C₁₄H₁₈N₄O₃)标准品：纯度大于或等于99.5％。

3.19 二甲氧甲基苄氨嘧啶(ormetoprim, CAS号：6981-18-6，分子式：C₁₄H₁₈N₄O₂)标准品：纯度大于或等于99.0％。

3.20 空白样品提取液：用不含三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶残留的样品，按照6.1,6.2制备空白样品提取液。

3.21 标准储备液：准确称取适量三甲氧苄氨嘧啶、二甲氧苄氨嘧啶、二甲氧甲基苄氨嘧啶标准品，分别用乙腈配制成浓度为100 ug/mL的标准储备液。此溶液在0℃～4℃避光保存。

3.22 标准工作溶液：除蜂王浆、蜂蜜和牛奶样品标准溶液用流动相起始比例溶液配制以外，其余样品根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成适当浓度的标准工作溶液。置于0℃～4℃避光保存。

3.23 阳离子固相萃取柱：PCX, 60 mg, 3 mL，或相当者；使用前用3 mL水和3 mL甲醇活化。

3.24 0.22 um微孔滤膜，有机系。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)。

4.2 组织捣碎机。

4.3 天平：感量为0.1 mg和0.01g。

4.4 均质器：10000r/min。

4.5 离心机：10000r/min。

4.6 氮吹仪。

4.7 具塞塑料离心管：50 mL。

5 试样制备与保存

5.1 试样制备

5.1.1 牛奶

取代表性样品500 g,混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的容器内，密闭并标明标记。

5.1.2 肌肉、内脏和鱼等试样

取代表性样品500 g，将其切碎后，依次用捣碎机将样品加工成浆状，混匀，分装入洁净的盛样袋内，密封并标明标记。

5.1.3 蛋

取有代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内，密封并做好标识。

5.1.4 蜂产品

取有代表性样品量500 g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对王浆样品将其搅拌均匀。制备好的试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。

5.2 试样的保存

王浆、肌肉、内脏和鱼等试样于-18℃冷冻保存；奶和蛋试样于0℃～4℃保存；蜂蜜试样于常温下避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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