6 测定步骤

6.1 提取

准确称取5g(精确至0.01g)均匀试样，于50 mL塑料离心管中，加入30 mL乙腈,2 mL异丙醇和10 mL柠檬酸缓冲溶液(3.11)，在2000r/min下涡旋混合提取5 min, 4000r/min离心5 min，上清液转移至250 mL梨形瓶中。重复上述提取操作，合并提取液，加入6 mL异丙醇后在40℃±2℃的温度下旋转浓缩至5 mL左右，转移浓缩液至50 mL塑料离心管中，并用5 mL柠檬酸缓冲液(3.11)润洗梨形瓶，合并洗液，在4℃下8500r/min冷冻离心10 min(4.3)，过0.45um滤膜(3.20)后待净化。

6.2 净化

将MEP柱(3.18)和MCX柱(3.19)按照从上到下顺序装好，依次用3 mL甲醇、3 mL水和3 mL柠檬酸缓冲液(3.11)活化。转移6.1.1中样液至固相萃取柱的顶部，以0.5 mL/min流速过柱。用3 mL柠檬酸缓冲液(3.11)、3 mL水、3 mL水-甲醇溶液(3.13)淋洗柱，抽干5 min后，依次用4 mL甲醇和6 mL甲醇-氨水溶液(3.12)，洗脱柱上的待分析成分，合并收集洗脱液，在氮吹浓缩装置上于40℃±2℃的温度下蒸干。加入1.0 mL含0.1％甲酸的水-甲醇(3.13)溶液振荡溶解残渣后，过0.22 um滤膜(3.20)滤液供液相色谱-质谱测定。

6.3 测定

6.3.1 高效液相色谱条件

a)色谱柱：C₁₈柱，150 mm×4.6 mm(内径)，粒径3.0 um或相当者；

b)流动相：A：含0.1％甲酸的乙腈,B：含0.1％甲酸2 mmol/L乙酸铵水溶液＋甲醇(95+5，体积比)；流速：600uL/min，梯度洗脱程序见表1;

表1 梯度洗脱程序表

c)柱温：35℃;

d)进样量：20 uL。

6.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾ESI，正离子；

b)扫描方式，多反应监测MRM;

c)雾化气(GSl)、气帘气(CUR)、辅助气(GS2)、碰撞气(CAD)均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以及离子源温度(TEM)使质谱灵敏度达到检测要求。

d)电喷雾电压(IS)、碰撞电压(CE)、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)、碰撞室出口电压(CXP)应优化至最佳灵敏度。

6.3.3 定量测定

根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准曲线工作液应有5个浓度水平，应包括零点。基质标准工作液和待测液中76种药物的响应值均应在仪器线性响应范围内。如果含量超过线性范围，应用基质空白溶液稀释到合适浓度后分析。

6.3.4 定性测定

按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定性离子对的相对丰度，是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示，应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

6.4 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

7 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中药物的残留含量，计算结果需扣除空白值：

式中：

X_i—试样中药物残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c_i—从标准曲线上得到的药物残留量的溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—最终样液代表的试样质量，单位为克(g)。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。