3.4测定步骤

3.4. 1提取与净化

称取约20 g试样(精确至0.1g)于250 mL锥形瓶中，加入30 mL 0.5mol /L硫酸及80 mL丙酮，用振荡器激烈振荡30 min，抽滤，残渣返回锥形瓶加入30 mL丙酮，同样进行振荡和抽滤操作，合并全部滤液于250 mL分液漏斗中，加入30 mL三氯甲烷，振摇5 min，稍放置后分取三氯甲烷层，在残留水层中加入20 mL三氯甲烷，同样进行振荡和分取操作二次。合并全部三氯甲烷层于250 mL锥形瓶，加入20 g无水硫酸钠，振荡10 min，过滤于250 mL茄形瓶，用20 mL三氯甲烷洗涤锥形瓶，并用此洗涤液洗涤滤纸上的残渣，合并全部洗涤液于茄形瓶，在40℃下用旋转蒸发器蒸去溶剂。在残渣中加1 mL乙腈溶解，再加入10 mL 0.5 mol/L硫酸，振荡10 min。

依次用5 mL乙腈、5 mL蒸馏水及5 mL 0.5 mol/L硫酸把C₁₈硅胶微型柱洗净。将茄形瓶中的溶液注入此柱，加入10 mL乙腈，收集流出液于100 mL茄形瓶，在40℃以下用旋转蒸发器蒸去溶剂。

3.4.2 酯化

3.4.2.1 在残渣中加入5 mL甲醇及0.08 mL浓硫酸溶解，室温下放置一夜后，用15 mL蒸馏水及20 mL 二氯甲烷洗入100 mL分液漏斗，振摇，稍放置后分取二氯甲烷层，在残留水层中加入20 mL二氯甲烷，同样进行振荡及分取操作二次。合并全部二氯甲烷层于200 mL三角瓶，加入20 g无水硫酸钠，振荡10 min后过滤于200 mL茄形瓶，用二氯甲烷洗涤三角瓶，再用此洗涤液洗涤滤纸上的残渣，在40℃下用旋转蒸发器蒸去溶剂。

3.4.2.2 用20 mL 0.2 mol/L碳酸氢钠溶液20 mL正己烷将残留物洗入100 mL分液漏斗，振荡5 min，放置后分取水层，向水层中加入20 mL正己烷，同样进行振荡及分取操作，在水层中加入5 mL 1 mol/L盐酸及20 mL二氯甲烷，分取二氯甲烷层，在残留水层中加入20 mL二氯甲烷，同样进行振荡和分取操作二次，合并全部二氯甲烷层于200 mL锥形瓶，加入20 g无水硫酸钠，振荡10 min后过滤200 mL茄形瓶，用二氯甲烷洗涤锥形瓶，再用此洗涤液洗涤滤纸上的残渣，在40℃下用旋转蒸发器蒸去溶剂，向残渣中加入蒸馏水-乙腈-甲酸混合液(11+9+0.01)溶解为2 mL作为试验溶液。供高效液相色谱仪测定。

3.4.2.3 标准品的酷化

取适用浓度的标准工作液于100 mL茄型瓶中，用旋转蒸发器于40℃下蒸去溶剂，然后按(3.4.2.1)同样操作，用蒸馏水-乙腈-甲酸(11+9+0.01)溶解，并稀释成适当浓度的标准衍生溶液。

3.4.3 测定

3.4.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：内径4 mm，长25 cm的不锈钢ODS填充柱；

b)色谱柱温度：室温；

c)流动相：蒸馏水-乙腈-甲酸混合液(11+9+0.01) ;

d)流速：1.0 mL/min;

e)紫外检测器：波长275 nm。

3.4.3.2 液相色谱测定

根据试样中被测调环酸钙含量情况，选定浓度相近的标准工作液。标准工作液和待测样液中调环酸甲酯的响应值均在仪器检测的线性范围内。对标准工作液与样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，调环酸甲酯的保留时间约为4.3 min。

3.4.4 空白试验

除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中调环酸钙的残留含量：

式中：X—试样中调环酸钙含量，mg /kg;

A—样液中调环酸甲酯的色谱峰面积，mm²;

A_s—标准工作液中调环酸甲酯的色谱峰面积，mm²;

c—标准工作液中调环酸的浓度,ug/mL;

V—样液最终定容体积，mL;

m—最终样液所代表的试样,g;

1.18—调环酸钙与调环酸的分子量之比(250/212)。

注：计算结果豁将空白值扣除。

4 侧定低限，回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.04 mg/kg。

4.2 回收率

大米中调环酸添加浓度及回收率的实验数据：

在0.04 mg/kg时，回收率为74.5％；

在0.20 mg/kg时，回收率为85.0％;

在0.80 mg/kg时，回收率为93.0％。

文章来源：《食品化妆品检验卷农药残留检测方法》

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