1．原理

样品中的OA经提取、净化、浓缩后，以乙腈一1．5％乙酸为流动相，采用高效液相色谱仪荧光检测器进行测定，外标法定量。

2．试剂和材料

乙腈、三氯甲烷、石油醚、盐酸、硫酸、乙酸、碳酸氢钠水溶液(50g／L)、氯化钾水溶液(40g／L)、氯化钾硫酸溶液[600mL氯化钾水溶液(40g／L)加入400mL浓硫酸]、乙腈一氯化钾硫酸溶液(90十10)、6mol／L盐酸。OA标准品(纯度>95％)。

OA标准溶液：称取OA标准品配成5.1mg／mL乙腈溶液，用乙腈将上述溶液准确稀释成最终浓度为1.0μg／mL的标准工作液。

3．仪器

高效液相色谱仪并配备荧光检测器，粉碎器，振荡器，旋转蒸发器，溶剂过滤器(附有机滤膜)，滤膜(0.45μm)，微量注射器。

4．测定步骤

(1)提取 称取10．0g(精确至0.1g)试样，置于250mL具塞锥形瓶中，加100mL乙腈一氯化钾硫酸溶液，湿润瓶塞，盖紧，振荡30min后，过滤于100mL容量瓶中，用乙腈-氯化钾硫酸溶液洗涤滤渣数次，滤液最终定容至100mL。取定容后的滤液50．0mL于分液漏斗内，用石油醚萃取两次[每次用量20mL。弃去石油醚层，在乙腈一水层中加20mL水，用三氯甲烷3次萃取毒素(用量依次为25mL、15mL，、15mL)]，弃去水层。将三氯甲烷溶液用5％碳酸氢钠溶液萃取3次(每次用量20mL)，收集水层合并液。并用6moI／L盐酸调节水溶液pH≈1．5后，再用三氯甲烷3次反萃取毒素(用量依次为25mL、15mL、15mL)。

合并3次三氯甲烷层，并于-18℃冷冻，滤去冰水。然后全量移入旋转蒸发器内于30℃下蒸干，残渣用乙腈-1．5％乙酸溶解，并定容至1．0mL。经0．4Sμm滤膜滤至样品瓶内，供液相色谱仪测定。

(2)测定 色谱条件：色谱柱(200mm×2．1mm，5μm)，流动相(乙腈-1．5％乙酸)，流速0．2mL／min，激发波长333nm，发射波长460nm。

分别将标准工作液依次以2μL、4μL、6μL、8μL、10μL自动进样(相当于OA0.2ng、0.4ng、0.6ng、0.8ng、1.0ng)，得到峰面积与进样量的标准工作曲线(在0.2～1.0ng线性范围内)。分别将标准工作液和样液等体积穿插进样测定，以外标法定量。

5．结果计算

X为试样中赭曲霉毒素A的含量，μg／kg；A为样液中赭曲霉毒素A的峰面积；c为混合标准工作液中OA的浓度；ng／mL ；V为样液最终定容体积，mL；As为混合标准工作液中OA的峰面积；m为最终样液所代表的试样质量，g。