1．制备镀铜镉柱

(1)置镉粒于锥形瓶中(所用镉粒的量以达到要求的镉柱高度为准)。

(2)加足量的盐酸以浸没镉粒，摇晃几分钟。

(3)滗出溶液，在锥形烧瓶中用水反复冲洗，直到把氯化物全部冲洗掉。

(4)在镉粒上镀铜。向镉粒中加入硫酸铜溶液(每克镉粒约需2.5mL)，振荡1min。

(5)滗出液体，立即用水冲洗镀铜镉粒，注意镉粒要始终用水浸没。当冲洗水中不再有铜沉淀时即可停止冲洗。

(6)在用于盛装镀铜镉粒的玻璃柱的底部装上几厘米高的玻璃纤维。在玻璃柱中灌入水，排净气泡。

(7)将镀铜镉粒尽快地装入玻璃柱，使其暴露于空气的时间尽量短。镀铜镉粒的高度应在15～20cm的范围内。

注：避免在颗粒之间遗留空气。不能让液面低于镀铜镉粒的顶部。

(8)新制备柱的处理。将由750mL水、225mL硝酸钾标准溶液、20ml缓冲溶液和20mL EDTA溶液组成的混合液以不大于6ml／min的流量通过刚装好镉粒的玻璃柱，接着用50ml水以同样流速冲洗该柱。

2．检查柱的还原能力

每天至少要进行两次，一般在开始时和一系列测定之后。

(1)用移液管将20ml的硝酸钾标准溶液移入还原柱顶部的贮液杯中，再立即向该贮液杯中添加5mL盐酸一氨水缓冲溶液。用一个100mL的容量瓶收集洗提液。
洗提液的流量不应超过6ml／min。

(2)在贮液杯将要排空时，用约15mL水冲洗杯壁。冲洗水流尽后，再用15ml。水重复冲洗。当第二次冲洗水也流尽后，将贮液杯灌满水，并使其以最大流量流过
柱子。

(3)当容量瓶中的洗提液接近100ml时，从柱子下取出容量瓶，用水定容至刻度，混合均匀。

(4)移取10ml洗提液于100ml容量瓶中，加水至60mL左右。然后按8(2)和8(4)操作。

(5)根据测得的吸光度，从标准曲线8(5)上可查得稀释洗提液2(4)中的亚硝酸盐含量(μg／mL)。据此可计算出以百分率表示的柱还原能力(NO-的含量为0.067μg／mL时还原能力为100％)。

如果还原能力小于95％，柱子就需要再生。

3．柱子再生

柱子使用后，或镉柱的还原能力低于95％时，按如下步骤进行再生。

(1)在100mL水中加入约5mLEDTA溶液和2mL盐酸，以10mL／min左右的速度过柱。

(2)当贮液杯中混合液排空后，按顺序用25mL水、25mL盐酸和25mL水冲洗柱子。

(3)检查镉柱的还原能力，如低于95％，要重复再生。

4．样品的称取和溶解

(1)液体乳样品量取90mL样品于500mL锥形瓶中，用22mL 50～55℃的水分数次冲洗样品量筒，冲洗液倾入锥形瓶中，混匀。

(2)乳粉样品 在lOOmL烧杯中称取10g样品，准确至0.001g。用112mL 50～55℃的水将样品洗入500mL锥形瓶中，混匀。

(3)乳清粉及以乳清粉为原料生产的粉状婴幼儿配方食品样品 在100mL烧杯中称取10g样品，准确至0.001g。用112mL 50-55℃的水将样品洗入500mL锥形瓶中，混匀。用铝箔纸盖好锥形瓶口，将溶好的样品在沸水中煮15min，然后冷却至约50℃。

5．脂肪和蛋白质的去除

(1)按顺序加入24mL硫酸锌溶液、24mL亚铁氰化钾溶液和40mL盐酸-氨水缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇匀。

(2)静置15min-lh。然后用滤纸过滤，滤液用250mL锥形瓶收集。

6．硝酸盐还原为亚硝酸盐

(1)移取20mL滤液于lOOmL小烧杯中，加入5mL盐酸-氨水缓冲溶液，摇匀，倒入镉柱顶部的贮液杯中，以小于6ml/min的流速过柱。洗提液(过柱后的液体)接入100mL容量瓶中。

(2)当贮液杯快要排空时，用15mL水冲洗小烧杯，再倒入贮液杯中。冲洗水流完后，再用15mL水重复一次。当第二次冲洗水快流尽时，将贮液杯装满水，以最大流速过柱。

(3)当容量瓶中的洗提液接近100mL时，取出容量瓶，用水定容，混匀。

7．测定

(1)分别移取20mL洗提液[6(3)]和20mL滤液[5(2)]于lOOmL容量瓶中，加水至约60mL。

(2)在每个容量瓶中先加入6mI．显色液1，边加边混；再加入5mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。

(3)加人2mI一显色液3，小心混合，使其在室温下静置5rain，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。

(4)在1．5min内用538nm波长，以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度。

8．标准曲线的制作

(1)分别移取(或用滴定管放出)0、2、4、6、8、10、12、16和20ml亚硝酸钠标准溶液于9个100ml容量瓶中。在每个容量瓶中加水，使其体积约为60ml。

(2)在每个容量瓶中先加入6ml显色液l，边加边混；再加入5mL显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。

(3)加入2mL显色液3，小心混合，使其在室温下静置5min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。

(4)在15min内，用538nm波长，以第一个溶液(不含亚硝酸钠)为对照测定另外八个溶液的吸光度。

(5)将测得的吸光度对亚硝酸根质量浓度作图。亚硝酸根的质量浓度可根据加入的亚硝酸钠标准溶液的量计算出。亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以µg／100ml表示。