1范围

本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素B₁的测定方法。

本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素B₁的测定。

2规范性引用文件

本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。

3原理

样品在稀盐酸环境中恒温水解，酶解，样液用碱性铁氰化钾衍生，正丁醇(或异丁醇)萃取后，经C₁₈反相色谱柱分离，用荧光检测器(Ex：375nm,Em：435nm)检测，外标法定量。

4 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1 正丁醇或异丁醇。

4.2铁氰化钾。

4.3 氢氧化钠。

4.4 浓盐酸。

4.5 三水乙酸钠。

4.6 冰乙酸。

4.7 甲醇：色谱纯。

4.8 维生素B₁标准品：硫胺素盐酸盐或硫胺素硝酸盐，纯度≥99%。

4.9 铁氰化钾溶液(20g/L)：称取2g铁氰化钾(4.2),用水溶解并定容至100mL。临用前配制。

4.10 氢氧化钠溶液(100g/L)：称取25g氢氧化钠(4.3),用水溶解并定容至250mL。

4.11 碱性铁氰化钾溶液：将5mL铁氰化钾溶液(4.9)与200mL氢氧化钠溶液(4.10)混合。临用前 配制。

4.12 盐酸(0.1mol/L)：吸取9mL浓盐酸(4.4),溶于1000mL水中。

4.13 盐酸(0.01mol/L)：吸取0.1mol/L盐酸(4.12)50mL,用水稀释并定容至500mL。

4.14 乙酸钠溶液（0.05mol/L）：称取6.80g三水乙酸钠（4.5）,加900mL水溶解，用冰乙酸（4.6）调pH值至4.0～5.0,定容至1000 mL。经0.45um微孔滤膜过滤。

4.15 乙酸钠溶液（2.0mol/L）：称取27.22g三水乙酸钠（4.5）,用水溶解并定容至100 mL。

4.16 混合酶溶液，称取2.345g木瓜蛋白酶（活力单位≥600U/g）、1.175g淀粉酶（活力单位≥4000U/g）,用水溶解并定容至50mL。临用前配制。

4.17 标准溶液

4.17.1 维生素B₁标准储备液（500ug/mL）:称取相当于硫胺素50mg（精确至0.1mg）的维生素B₁标准品（4.8）,用0.01mol/L盐酸（4.13）溶解并定容于100mL。置于0℃～4℃冰箱中，保存期为3个月。

4.17.2 维生素B₁标准中间液：准确吸取2.00mL标准储备液（4.17.1）,用水稀释并定容至100mL,此溶液中维生素B1浓度为10ug/mL。临用前配制。

4.17.3 维生素B₁标准工作液：分别吸取维生素B₁标准中间液（4.17.2）OmL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、5.00 mL、10.00mL,用水溶解并定容至100mL。该标准系列浓度分别为0ug/mL、0.05ug/mL、0.10ug/mL、0.20ug/mL、0.5ug/mL、1.O0ug/mL。临用前配制。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱仪，带有荧光检测器。

5.2 高压灭菌锅。

5.3 离心机：转速≥4000转/分钟。

5.4 pH计：精度 0.01。

5.5 组织捣碎机（转速在0转/分钟〜12000转/分钟可调）。

5.6 0.45um微孔有机滤膜。

5.7 天平:感量为0.001g和0.000lg。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中维生素K1的测定（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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