6 分析步骤

6.1试样的处理

6.1.1试液提取

称取5g～10g（精确至0.01g）试样（如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B1 5ug以上）于100 mL三角瓶中，加60mL 0.1mol/L盐酸（4.12）,充分摇匀，用棉花塞和牛皮纸封口，放入 高压灭菌锅内，在121℃下保持30min,待冷却至40℃以下后取出，轻摇数次；用2.0mol/L乙酸钠溶 液（4.15）调pH值至4.0左右，加入2.0 mL （可根据酶活力不同适当调整用量）混合酶液（4.16）, 摇匀后，置于37℃的培养箱中过夜；将酶解液转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，滤纸过滤， 取滤液备用。

6.1.2试液衍生化

取上述滤液10.00mL于25mL具塞比色管中，加入5mL碱性铁氰化钾（4.11）,充分混匀后， 加10.00mL正丁醇（或异丁醇）（4.1）,强烈振荡后静置约10min,充分分层，吸取正丁醇（或异丁醇）相（上层）于4000转/分钟6000转/分钟离心5 min,取上清液经有机微孔滤膜过滤（5.6）, 供进样用。

另取10.00mL标准工作液（4.17.3）,与试液同步进行衍生化。

注1：室温条件下衍生产物在4h内稳定。

注2：6.1.1和6.1.2操作过程应在避免强光照射的环境下进行。

6.2测定

6.2.1色谱参考条件

色谱柱：C₁₈反相色谱柱（粒径5um,250mm×4.6mm）或相当者。

流动相：0.05mol/L乙酸钠溶液（4.14）—甲醇（4.7）=65+35。

流速：1.00mL/min。

检测波长：激发波长375nm,发射波长435nm。 进样量：20uL。

6.2.2标准曲线绘制

将维生素B₁标准系列工作液（4.17.3）衍生物依次按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

6.2.3试液测定

将试液衍生物按上述推荐色谱条件进样测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。

7 分析结果的表述

试样中维生素B1的含量按式（1）计算：

式中：

X——试样中维生素B1的含量（以硫胺素计），单位为毫克每百克（mg/100g）；

c——试液的进样浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；

V——试样定容体积，单位为毫升（mL）；

m——试样质量，单位为克（g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

9 其他

当取样量为10.00g时，本标准中方法定量限为0.05mg/100g。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。