9 原理

利用植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum） ATCC 8014对烟酸和烟酰胺的特异性，在含有烟酸和烟酰胺的样品中生长产生的酸度和形成的光密度来测定烟酸和烟酰胺的含量。

10 试剂和材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

10.1 硫酸溶液A（10mol/L）:将质量分数为95%～98%的浓硫酸560mL缓慢加入到600mL水中， 边加边搅拌，冷却后定容至1000mL。

10.2 硫酸溶液B (lmol/L):吸取100mL10mol/L的硫酸溶液A (10.1),转移至1000 mL容量瓶 用水定容。

10.3 氢氧化钠溶液A (3.75 mol/L):称取150 g氢氧化钠于1000 mL烧杯中，用400 mL水溶解，冷 却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容。

10.4 氢氧化钠溶液B (0.375 mol/L):吸取100 mL氢氧化钠溶液A(10.3)转移至1000 mL容量瓶 用水定容。

10.5 氢氧化钠标准滴定溶液(0.1mol/L±0.0002mol/L):称取4g (精确至0.0001g)氢氧化钠用水稀释至1000mL,用邻苯二甲酸氢钾标定。保存此溶液的容器要密封，以防二氧化碳渗透。

10.5.1 氢氧化钠标准溶液的标定：称取约0.18g(精确至0.0001g)于105 ℃～110 ℃烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，用50 mL除二氧化碳的水溶于锥形瓶中，加两滴5g/L的酚酞指示剂，用配好的氢氧化钠溶液滴定至粉红色，同时作空白实验。氢氧化钠标准溶液的浓度为：

式中：

c—氢氧化钠的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

m——邻苯二甲酸氢钾的质量，单位为克(g);

V₁—氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升(mL);

V₂—空白试验氢氧化钠溶液的用量，单位为毫升(mL)。

10.5.2 酚酞溶液：称取0.5g酚酞溶于75 mL体积分数为95%的乙醇中，并加入20mL水，加入氢氧化钠标准滴定溶液(10.5),直至加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至100mL。

10.6 盐酸(0.1mol/L):吸取83 mL盐酸，用水稀释至1000 mL。

10.7 乙醇溶液：体积分数为25%。量取250 mL无水乙醇，加入750 mL水，混匀。

10.8 菌株：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) ATCC 8014。

10.9 培养基(或可使用商品化的合成培养基)

10.9.1 乳酸杆菌琼脂培养基：光解冻15 g,葡萄糖10 g,番茄汁100 mL,磷酸二氢钾2 g,聚山梨糖单油酸酯1g,琼脂10g,加蒸馏水至1000mL, pH6.8±0.2(20 ℃～25℃)。121℃高压灭菌15min, 备用。

10.9.2 乳酸杆菌肉汤培养基：光解冻15g,葡萄糖10 g,番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚山梨糖 单油酸酯1g,加蒸馆水至1000mL, pH 6.8±0.2(20℃～25℃)。121℃高压灭菌15min,备用。

10.9.3 烟酸测定用培养基：维生素测定用酸水解酪蛋白氨基酸(Casamino Acids) 12g,葡萄糖40g, 乙酸钠20 g, L-胱氨酸0.4g, DL-色氨酸0.2g,盐酸腺嘌呤20mg,盐酸鸟嘌吟20 mg,尿嘧啶20 mg, 盐酸硫胺素200 ug,泛酸钙200 ng,盐酸吡哆醇400ug，核黄素400 ug, p-氨基苯甲酸100 ug,生物素 0.8 ug,磷酸氢二钾1g,磷酸二氢钾1 g,硫酸镁0.4g,氯化钠20 mg,硫酸亚铁20 mg,硫酸猛20 mg。 加蒸憎水至 1000mL,调 pH 至 6.7±0.2 (20℃～25 ℃)。

10.10 标准溶液

10.10.1 烟酸标准贮备液(100ng/mL):在五氧化二磷干燥器中取出已干燥的烟酸标准品，称取50.0mg(精确至0.1 mg),用乙醇溶液(10.7)溶解并定容至500mL, 2℃～4℃冰箱冷藏，保存期为4个月。

10.10.2 烟酸标准中间溶液(10ug/mL):从烟酸标准贮备液(10.10.1)中吸取10 mL至100 mL容 量瓶，用乙醇溶液(10.7)定容，2 ℃～4 ℃冰箱冷藏，保存期为1个月。

10.10.3 烟酸标准工作液(100ng/mL):从标准中间液(10.10.2)中吸取5.0 mL,用水稀释至500 mL。 临用前配制。

10.11 0.9%生理盐水：称0.9 g氯化钠于100 mL容量瓶中，稀释至刻度，振荡溶解。分装于具塞试管 中，每管10 mL, 121℃灭菌15 min,每周准备一次。

10.12 溴麝香草酚蓝指示剂：称取0.1g溴麝香草酚蓝于研钵中，加入1.6mL氢氧化钠标准滴定溶液(10.5)研磨，加少许水至完全溶解，转移至250mL容量瓶中用水定容。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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