6 分析步骤

6.1 试样的预处理

6.1.1 含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确到0.0001g）加入约25mL45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确到0.0001g）于150mL锥形瓶中，再加入约0.5g淀粉酶（4.1）,摇匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置于50℃～60℃的培养箱内培养约30min,取出冷却至室温。

6.1.2 不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约5.0g（精确到0.0001g）加入约25mL 45℃～50℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0g（精确到0.0001g）于150mL锥形瓶中，振摇，静置5min～10min,充分溶解，并冷却至室温。

6.1.3 提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约10min。

6.1.4 沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸（4.4）调节试样溶液的pH值至1.7±0.1,放置约2min后，再用氢氧化钠溶液（4.5）调节试样溶液的pH值至4.5±0.1。将试样溶液转至50mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后经滤纸过滤，滤液再经0.45um微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。

6.2 参考色谱条件

色谱柱：C₁₈柱（粒径5um,150mm×4.6mm）或具有同等性能的色谱柱。

流动相：甲醇（4.7）70mL,异丙醇（4.8〉20mL,庚烷磺酸钠（4.9）1g,用910mL水溶解并混匀后，用高氯酸（4.6）调pH至2.1±0.1,经0.45um膜过滤。

流速：1.0mL/min。

检测波长：261nm。

柱温：25℃。

进样量：10uL。

6.3 定量分析

6.3.1 标准曲线绘制

将烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液（4.10.3）依次进行色谱测定。记录各组分的色谱峰面积或峰高，以峰面积或峰高为纵坐标，以标准测定液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

6.3.2 试样测定

将试样待测液（6.1.4）进行色谱测定。记录各组分色谱峰面积或峰高，根据标准曲线计算出试样待 测液中烟酸及烟酰胺各组分的浓度C_i。

7 分析结果的表述

7.1 试样中烟酸或烟酰胺含量的计算

试样中烟酸或烟酰胺的含量按（1）式计算：

式中：

X_1或2—试样中烟酸或烟酰胺的含量，单位为微克每百克（ug/100g）；

m—试样的质量，单位为克（g）;

c_i—试样待测液中烟酸或烟酰胺的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；

V—试样溶液的体积，单位为毫升（mL）。

7.2 试样中维生素烟酸总含量的计算

试样中维生素烟酸的总含量按（2）式计算：

X =X₁+X₂.....................................（2）

式中：

X—试样中维生素烟酸的总含量，单位为微克每百克（ug/100g）；

X₁—试样中烟酸的含量，单位为微克每百克（ug/100g）:

X₂—试样中烟酰胺的含量，单位为微克每百克（ug/100g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

相关链接：乳品中烟酸和烟酰胺的测定—高效液相色谱法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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