6 分析步骤

6.1 测试菌液的制备

6.1.1 把植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) ATCC 8014冻干菌粉转入乳酸杆菌肉汤培养基(4.7.2) 试管中，36℃±1℃培养24h。再转接至乳酸杆菌琼脂培养基(4.7.1)试管中，36℃±1℃培养24h。 培养好的乳酸杆菌琼脂培养基(4.7.1)试管的培养物作为贮备菌种。

6.1.2 从贮备菌种培养基上分别转接到三个乳酸杆菌琼脂培养基(4.7.1)试管中，放入培养箱中36℃±1℃培养24h。每月转接一次，作为月接种管贮于冰箱中。每月定期从月接种管中重新接种3个转接 管保存新菌株。

6.1.3 从月接种的培养管中的一支再接种一支乳酸杆菌琼脂培养基(4.7.1)试管，36℃±1℃培养24h, 作为日接种管每日测定用。

6.1.4 从日接种管中接种一管乳酸杆菌肉汤培养基(4.7.2),36℃±1℃培养24h。在无菌条件下离 心该培养液10 min (2000转/分钟),弃去上清液。用10mL生理盐水(4.1)振荡洗涤菌体，离心10 min(2000转/分钟)，弃去上清液，用10mL生理盐水(4.1)振荡清洗。如前离心操作，弃去上清液。再 加10mL生理盐水(4.1),混匀。吸1mL该菌悬液于10mL生理盐水(4.1)中，混匀制成测试菌液。

6.1.5 以生理盐水(4.1)做对照，在分光光度计550 nm波长下，测测试菌液(6.1.4)的光密度值， 此值应在60%～80%。

6.2 试样的处理

称取2g(精确至0.0001g)固态试样或5g(精确至0.0001g)液态试样(约含泛酸0.1mg)于250mL三角烧杯中。加入10 mL Tris缓冲液(4.8),再加入少量水，121℃水解15 min,冷却。用盐酸(4.9)调pH至4.5±0.2,转入250 mL容量瓶中用水定容。过滤,吸4 mL滤液，稀释至泛酸的浓度约为5ng/mL。

6.3 标准曲线的制作

按表1顺序加入蒸馄水、标准溶液和培养基于试管中，表1中每一编号需制作3管。试管S2至S10 中，相当泛酸含量为 0ng、5 ng、10ng、15 ng、20 ng、25 ng、30 ng、40ng、50ng。

表1标准曲线管制作

6.4 试样管的制作

按表2顺序加入蒸镏水、试样和培养基于试管中，一式三份。

表2试样管的制作

6.5 灭菌

将标准曲线管和试样管121℃灭菌5 min,迅速冷却到室温(商品化培养基按标签说明进行灭菌)。 注：保证加热和冷却过程中条件均匀，灭菌管数过多或距离太近，在灭菌锅中都可产生不良影响。

6.6 接种

在无菌条件下每管中均加入一滴(约50uL)测试菌液(6.1.4),加盖，充分振荡混匀所有试管(标 准曲线未接种空白管S1除外)。

6.7 培养

36℃±0.5℃培养16h～24h。对每个试管进行目测检查，未接种管中培养液应是澄清的，标准曲 线管和试样管中培养液的浊度应有梯度。未接种管中若出现混浊，则测定无效。

6.8 测定

以接种空白管(表1中试管号S2)做对照，取出最高浓度标准曲线管S7,振荡5 s,在波长550 nm条件下读取光密度值，放回重新培养。2h后同等条件重新测该管的光密度，如果两次光密度的绝对差 结果≤2%,则取出全部检验管测定标准溶液和试样的光密度。

6.9 标准曲线的绘制

以标准曲线管泛酸含量作横坐标，以光密度值为纵坐标绘制标准曲线。

6.10 试样管中泛酸含量的计算

按照6.8每个试样管测定的光密度值，从标准曲线中查得对应的泛酸含量。每一编号的三个试样管应计算管中每毫升测定液泛酸的含量，并与三者平均值相比较。相对偏差小于15%的试管为有效试管， 无效试样管应舍去。有效试样管总数应大于所有试样管总数的2/3。重新计算每一编号的有效试样管中 每毫升测定液泛酸含量的平均值，以此平均值计算全部编号试样管的总平均值Gx。

注：样品管中泛酸含量低于5 ng,高于50 ng的值应舍去。

7 分析结果的表述

试样中泛酸含量按式(1)计算：

式中：

X一试样中泛酸含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

C_x—6.10中计算所得的总平均值，单位为微克(ug)；

f—稀释倍数；

m—试样的质量，单位为克(g)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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