6 分析步骤

6.1 试样处理

6.1.1 淀粉类试样

称取混合均匀的固体试样约5g或液体试样约50g(均精确至0.0001g)于250mL三角瓶中，加入1.0g抗坏血酸(4.3),固体试样需用50mL 45℃～50的水溶解并混合均匀。加入1g a-淀粉酶(4.1),向三角瓶中充氮后盖上瓶塞，置60±2培养箱(5.7)内酶解30min。

6.1.2 非淀粉类试样

称取混合均匀的固体试样约10g或液体试样约50g(均精确至0.0001g),置于250mL三角瓶中，加入1.0g抗坏血酸(4.3),固体试样需用50mL 45～50的水溶解并混合均匀。

6.2 待测液的制备

6.2.1 皂化:将100mL 95%乙醇(4.9)加入到上述试样溶液中，混匀并加入25mL氢氧化钾溶液(4.10)混匀，放入磁力棒，充入氮气排出空气，盖上胶塞。将1000mL的烧杯中加入约300mL的水，将烧杯放在恒温磁力搅拌器(5.3)上，当水温控制在53±2时，将三角瓶放入烧杯中，磁力搅拌皂化约45min后，取出立刻冷却到室温。

6.2.2 提取：将皂化液全部转入500mL分液漏斗中，加入100mL石油醚(4.4),轻轻摇动，排气，盖好瓶塞，室温下振荡10min后静置分层，将水相转入另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取。合并有机相，用水洗至近中性。有机相通过无水硫酸钠(4.2)过滤脱水。滤液收入500mL烧瓶中，于旋转蒸发器(5.2)上在40±2的充氮条件下蒸至近干(绝不允许蒸干)。用石油醚(4.4)溶解残渣并转移至10mL容量瓶中定容。

从上述容量瓶中准确移取2.0mL石油醚溶液于10mL螺盖试管中，在40±2氮吹仪(5.6)上吹干。向试管中加1.0mL正己烷(4.8),振荡溶解残渣。再将试管以不低于5000转/分钟的速度离心(5.4)10min,取出静置至室温后待测。

注：实验操作过程中应注意避光。

6.3 色谱测定

6.3.1 参考色谱条件

色谱柱：C₁₈ 柱，250mm×4.6mm,5um,或具同等性能的色谱柱。

流动相：三氯甲烷-腈-甲醇=3+12+85，将1L的流动相中加入0.4g的抗坏血酸，经0.45um膜过滤 后备用。

流速：2.0mL/min。

检测波长：450nm。

柱温：35℃±1℃。

进样体积：20uL。

6.3.2 标准曲线的绘制

分别将 β-胡萝卜素标准工作液(4.12.3)注入液相色谱仪中,得到峰面积。以 峰面积为纵坐标，以β-胡萝卜素标准工作液浓度为横坐标绘制标准曲线。

6.3.3 试样测定

将待测液(6.2.2)注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中β-胡萝卜素的浓度。

7 分析结果的表述

试样中β-胡萝卜素的含量按式(1)计算：

式中：

X—试样中β-胡萝卜素的含量，单位为微克每百克(ug/100g)；

c—从标准曲线得到待测液中β-胡萝卜素的浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)；

m—试样的质量，单位为克(g);

10—样液体积。

注：此计算结果为顺、反式β-萝卜素的总量。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

9 其他

本标准检出限为2ug/100g。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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