5.2 净化

5.2.1 用石油醚分配净化：将以上收集的提取液移入250 mL分液漏斗中，再按各种食品加入一定体 积的氯化钠溶液(40g/L)(见表1)。再加入40 mL石油醚，振摇2 min,待分层后，将下层甲醇-氯化钠水层移于原量筒中，将上层石油醚溶液从分液漏斗上口倒出，弃去。再将量筒中溶液转移于原分液漏 斗中。再重复用石油醚提取两次，每次30 mL,最后将量筒中溶液仍移于分液漏斗中。奶油样液总共用石油醚提取两次，每次40mL。

5.2.2 用三氯甲烷分配提取：于原量筒中加入20mL三氯甲烷，摇匀后，再倒入原分液漏斗中，振摇 2min。待分层后，将下层三氯甲烷移于原量筒中，再重复用三氯甲烷提取两次，每次10mL合并于原 量筒中。弃去上层甲醇水溶液。

5.2.3 用水洗三氯甲烷层与浓缩制备：将合并后的三氯甲烷层倒回原分液漏斗中，加入30 mL氯化钠 溶液(40g/L),振摇30 s,静置。待上层混浊液有部分澄清时，即可将下层三氯甲烷层收集于原量筒中。 加入10 g无水硫酸钠，振摇放置澄清后，将此液经装有少许无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于100 mL 蒸发皿中。氯化钠水层用10 mL三氯甲烷提取一次，并经过滤器一并滤于蒸发皿中。最后将无水硫酸钠也一起倒于滤纸上，用少量三氯甲烷洗量筒与无水硫酸钠，也一并滤于蒸发皿中，于65 ℃水浴上通 风挥干，用三氯甲烷将蒸发皿中残留物转移于浓缩管中，蒸发皿中残渣太多，则经滤纸滤入浓缩管中。 于65℃用减压吹气法将此液浓缩至0.4 mL以下，再用少量三氯甲烷洗管壁后，浓缩定量至0.4mL备用。

5.3 测定

5.3.1 硅胶G薄层板的制备

薄层板厚度为0.3 mm, 105℃活化2h,在干燥器内可保存1d～2d。

5.3.2 点板

取薄层板(5cm×20cm)两块，距板下端3cm的基线上各滴加两点，在距第一与第二板的左边缘 0.8cm～1cm处各滴加10uL黄曲霉毒素M1与B1混合标准使用液，在距各板左边缘2.8cm～3cm处 各滴加同一样液点(各种食品的滴加体积见表1),在第二板的第2点上再滴加10 uL黄曲霉毒素M1与B1混合标准使用液。一般可将薄层板放在盛有干燥硅胶的层析槽内进行滴加，边加边用冷风机冷风吹干。

5.3.3 展开

5.3.3.1 横展：在槽内加入15 mL事先用无水硫酸钠脱水的无水乙醚(每500mL无水乙醚中加20g 无水硫酸钠)。将薄层板靠近标准点的长边置于槽内，展至板端后，取出挥干，再同上继续展开一次。

5.3.3.2 纵展：将横展两次挥干后的薄层板再用异丙醇-丙酮-苯-正己烷-石油醚(沸程60℃～90℃)-三氯甲烷(5+10+10+10+10+55)混合展开剂纵展至前沿距原点距离为10cm～12cm取出挥干。

5.3.3.3 横展：将纵展挥干后的板再用乙醚横展1次～2次，展开方法同5.3.3.1。

5.3.4 观察与评定结果

5.3.4.1 在紫外光灯下将第一、二板相互比较观察，若第二板的第二点在黄曲霉毒素M1与B1标准点 的相应处出现最低检出量(M1与B1的比移值依次为0.25和0.43),而在第一板相同位置上未出现荧光点，则样品中黄曲霉毒素M1与B1含量在其所定的方法灵敏度以下(见表1)。

5.3.4.2如果第一板的相同位置上出现黄曲霉毒素M1与B1的荧光点，则第二板第二点的样液点是否各与滴加的标准点重叠，如果重叠，再进行以下的定量与确证试验。

5.3.5稀释定量

样液中的黄曲霉毒素M1与B1荧光点的荧光强度与黄曲霉毒素M1与B1的最低检出量(0.0004ug)的荧光强度一致，则乳、炼乳、乳粉、干酪与奶油样品中黄曲霉毒素M₁与B₁的含量依次为0.1ug/kg、0.2ug/kg、0.5ug/kg、0.5ug/kg及0.5ug/kg；新鲜猪组织(肝、肾、血、瘦肉)样品均为0.2ug/kg(见表1)。如样液中黄曲霉毒素M1与B1的荧光强度比最低检出量强，则根据其强度逐一进行测定，估计减少滴加微升数或经稀释后再滴加不同微升数,直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致为止。

5.3.6确证试验

在做完定性或定量的薄层板上，将要确证的黄曲霉毒素M1和B1的点用大头针圈出。喷以硫酸溶液(1+3),放置5min后,在紫外光灯下观察，若样液中黄曲霉毒素M1和点与标准点一样均变为黄色荧光，则进一步确证检出的荧光点是黄曲霉毒素M1和B1。

6分析结果的表述

黄曲霉毒素M1或B1的含量按式(2)进行计算。

式中：

X—黄曲霉毒素M1或B1含量，单位为微克每千克(ug/kg)；

V₁——样液浓缩后体积，单位为毫升(mL);

V₂—出现最低荧光样液的滴加体积，单位为毫升(mL);

D—浓缩样液的总稀释倍数；

m—浓缩样液中所相当的试样质量，单位为克(g);

0.0004—黄曲霉毒素M1或B1的最低检出量，单位为微克(ug)。

相关链接：食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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