北京普天同创生物科技有限公司
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。
5.2 分析天平:感量0.0000lg。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 冷冻高速离心机
5.5 恒温水浴锅
5.6 漩涡混合器
5.7 固相萃取装置
5.8 组织匀浆机
5.9 氮气吹干装置
5.10 离心管:50mL。
5.11 滤膜:0.45um。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
鱼去鳞、去皮,沿背部取肌肉组织,或取鱼肌肉+皮组织,绞碎,并使均质。
—取均质后的供试样品,作为供试试料。
—取均质后的空白样品,作为空白试料。
—取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 标准曲线的制备
分别精密量取10ug/mL青霉素G标准工作液及10ug/mL苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素混合标准工作液适量,用流动相稀释,配制成青霉素G浓度为20、50、100、200、400、800和1600ug/L,苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素浓度为100、200、400、800、1600、3200和6400ug/L的系列青霉素类药物混合标准溶液,各取500uL,按衍生化步骤操作,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2 提取
称取试料(5±0.05)g,于50mL离心管中,加乙腈15mL,混匀,加正己烷5mL,漩涡混匀,6000r/min离心15min,弃正己烷层液,取下层液,于另一离心管中。残渣中再加乙腈10mL、正己烷5mL,漩涡混匀,6000r/min离心15min)弃正己烷层液,合并两次下层液,于40℃水浴旋转蒸干,用水5mL溶解残余物,备用。
7.3 净化
HLB柱依次用甲醇3mL和水3mL活化,取备用液过柱,用水1mL淋洗,乙腈3mL洗脱,收集洗脱液,于45~50℃水浴氮气吹干。用流动相1.0mL溶解残余物,漩涡混匀,备用。
文章来源:《食品安全国家标准汇编检验方法(一)》
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