5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。

5.2 分析天平：感量0.00001g。

5.3 天平：感量0.01g。

5.4 均质机

5.5 漩涡混合仪

5.6 超声波水浴

5.7 高速冷冻离心机

5.8 氮气吹干浓缩仪

5.9 固相萃取装置

5.10 滤膜：0.45um

5.11 聚丙烯离心管

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶，混合均匀。

—取均质后的供试样品，作为供试试料。

—取均质后的空白样品，作为空白试料。

—取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。

6.2 试料的保存

-20℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 标准曲线的制备

精密量取混合标准工作液适量，用水稀释，漩涡混匀，使达氟沙星浓度为15、30、60、120、240和480ug/L,氟甲喹浓度为25、50、100、200、400和800ug/L,其他喹诺酮类药物浓度为50、100、200、400、800和1600ug/L的系列标准溶液，供高效液相色谱测定。以峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2 提取

称取试料(1±0.02)g,于15 mL丙烯离心管中，加乙腈-10%三氯乙酸溶液5mL,漩涡混匀，超声5min,于4℃ 8000r/min离心6min,取上清液，备用。

7.3 净化

SPE柱依次用甲醇3mL和水3mL活化，取备用液过柱，控制流速1mL/min,用10%甲醇水溶液3mL淋洗，抽干，用甲醇3mL洗脱，抽干。收集洗脱液，于60～70℃氮气吹干，用乙腈—柠檬酸/乙酸铵缓冲液500uL溶解残余物，涡漩混匀，于4℃以下12000r/min离心6min,取上清液，供高效液相色谱测定。

7.4 测定

7.4.1 色谱条件

色谱柱：C₁₈(250mm×4.6mm,粒径5um),或相当者。

流动相：乙腈-柠檬酸/乙酸铵缓冲液，梯度洗脱见表1。

柱温：50℃。

进样量：20uL。

荧光检测器：程序波长变化设置见表2。

延迟5min后进下一试样。

表1流动相梯度洗脱变化设置

表2荧光波长程序变化设置

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。