1 安全提示

本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。

2 一般规定

本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682—2008中规定的三级水。未指明的溶液为水溶液。

试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603之规定制备。

3 鉴别试验

3.1 荧光试验

3.1.1 方法原理

维生素B2(核黄素)具芳香环和杂环，有长共轭结构的π→π*跃迁，具有荧光性，在酸、碱性条件下及加入各种还原剂均会使维生素B2(核黄素)转变为无荧光的物质。

3.1.2 试剂和材料

3.1.2.1 盐酸溶液：1+2。

3.1.2.2 氢氧化钠溶液：40g/L。

3.1.2.3 连二亚硫酸钠。

3.1.3 分析步骤

取约1mg实验室样品，加100mL水溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光；分成二份：一份中加盐酸溶液或氢氧化钠溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。

3.2 紫外-可见吸收光谱鉴别

3.2.1 方法原理

维生素B2(核黄素)具苯环结构，有多个共轭双键，其紫外-可见吸收光谱中有三个吸收峰(444nm,375nm与267nm),用A_444nm/A_267nm及A_375nm/A_267nm的比值来鉴别维生素B2(核黄素)。

3.2.2.1 冰乙酸。

3.2.2.2 乙酸钠溶液：14g/L。

3.2.2.3 实验室样品溶液：避光操作。取约0.075g实验室样品，精确至0.001g,置烧杯中，加1mL冰乙酸与75mL水，加热溶解后，加水稀释，冷却至室温，移置500mL棕色容量瓶中，再加水稀释至刻度，摇匀；精密量取10mL,置100mL棕色容量瓶中，加7mL乙酸钠溶液，并用水稀释至刻度，摇匀。

3.2.3 仪器和设备

3.2.3.1 紫外-可见分光光度仪。

3.2.3.2 石英池(1cm)。

3.2.4 分析步骤

取实验室样品溶液扫描，在波长(441±1)nm、(375±1)nm与(267±1)nm处有最大吸收，并测定吸光度(A),计算A_375nm/A_267nm的比值为0.31～0.33和A_444nm/A_4267nm的比值为0.36～0.39。

3.3 红外光吸收图谱鉴别

3.3.1 试剂和材料

溴化钾：光谱纯，干燥品。

3.3.2 分析步骤

在红外灯下进行，以防止吸潮。

将实验室样品和溴化钾粉末置入玛瑙乳钵中研匀，装入压片模具制备样片并进行扫描。

4 维生素B2的测定

4.1 方法原理

维生素B2(核黄素)具苯环结构，有多个共轨双键，在波长444nm处有最大吸收，将样品溶液于该波长处测定吸光度，以百分吸光系数()计算即得其质量分数。

4.2 试剂和材料

4.2.1 冰乙酸。

4.2.2 乙酸钠溶液：14g/L。

4.3 仪器和设备

同3.2.3。

4.4 分析步骤

取实验室样品溶液(3.2.2.3),在波长(441±1)nm处，以水为空白对照，测定吸光度(A)。

4.5 结果计算

维生素B2(核黄素)的质量分数w1，数值以％表示，按公式(1)计算：

式中：

5000—实验室样品稀释体积，单位为毫升(mL)；

323—维生素B2(核黄素)的百分吸光系数(耳盘)；

A—实验室样品溶液(3.2.2.3)的吸光度数值；

m—实验室样品质量的数值，单位为克(g)；

w2—7测得的干燥减量的数值，％。

两次平行测定结果的绝对差值不大于1.5%。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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