5 比旋光度的测定

5.1 方法原理

维生素B2(核黄素)的核糖醇侧链2,3,4-位有三个不对称碳原子，具有旋光活性，在碱性条件下，呈左旋光性，以此检查样品的比旋度。

5.2 试剂和材料

5.2.1 二硝基苯肼试液：取1.5g 2,4-二硝基苯肼，加20mL硫酸溶液(1+1),溶解后，加水使成100mL,过滤。

5.2.2 无醛乙醇：取2.5g乙酸铅，置具塞锥形瓶中，加5mL水溶解后，加1000mL乙醇，摇匀，缓缓加25mL乙醇制氢氧化钾溶液(1→5),放置1h,强力振摇后，静置12h,倾取上清液，蒸馏即得。

检查：取25mL无醛乙醇，置锥形瓶中，加75mL二硝基苯肼试液，置水浴上加热回流24h,蒸去乙醇，加200mL硫酸溶液(2→100),放置24h后，应无结晶析出。

5.2.3 盐酸标准滴定溶液：c(HCl)=0.1mol/L。

5.2.4 无碳酸盐氢氧化钾溶液：取20g氢氧化钾，加100mL无醛乙醇，放置过夜后，吸取上清液,加无醛乙醇稀释成0.1mol/L的溶液，用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液标定后，再精密量取18mL,加新沸过的冷水至100mL)摇匀。

5.2.5 实验室样品溶液：称取约0.25g实验室样品，精确至0.0001g，加无碳酸盐氢氧化钾溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含维生素B2(核黄素)5mg的溶液，摇匀。

5.3 仪器和设备

5.3.1 旋光仪。

5.3.2 旋光测定管。

5.4 分析步骤

取实验室样品溶液，按GB/T613测定。

5.5 结果计算

维生素B2(核黄素)的比旋光度am(20℃,D)按公式(2)计算：

式中：

a—测得的旋光角,单位为度(。)；

l—旋光管的长度,单位为分米(dm);

Pa—溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

6 感光黄素的测定

6.1 方法提要

维生素B2(核黄素)几乎不溶于三氯甲烷，杂质感光黄素溶于三氯甲烷，在440nm处有紫外吸收，因此用三氯甲烷提取感光黄素，排除维生素B2(核黄素)的干扰后，在此波长处测定，作限量检查。但维生素B2(核黄素)在乙醇中稍有溶解，为克服测定时的干扰，所以必须使用无醇三氯甲烷。

6.2 试剂和材料

6.2.1 无水硫酸钠。

6.2.2 无醇三氯甲烷：取500mL三氯甲烷，用水洗涤3次，每次50mL,分取三氯甲烷层，用无水硫酸钠干燥12h以上，用脱脂棉过滤，蒸馏，即得。临用前配制。

6.3 仪器和设备

6.3.1 紫外-可见分光光度仪。

6.3.2 石英池(1cm)。

6.4 分析步骤

6.4.1 实验室样品溶液的制备：称取约0.025g实验室样品，精确至0.0001g,加10mL无醇三氯甲烷，振摇5min,过滤。

6.4.2 测定

取实验室样品溶液，在波长440nm处，以无醇三氯甲烷为空白，测定吸光度(A)。

7 干燥减量的測定

7.1 仪器和设备

7.1.1 扁形称量瓶。

7.1.2 恒温干燥箱。

7.2 分析步骤

称取约0.5g实验室样品，精确至0.0001g,置于(105+2)℃干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm,(105±2)℃干燥至恒重。

7.3 结果计算

维生素B2(核黄素)干燥减量的质量分数W2,数值以%表示，按公式(3)计算：

式中：

m1—干燥前实验室样品和称量瓶的总质量数值，单位为克(g)；

m2—干燥后实验室样品和称量瓶的总质量数值，单位为克(g)；

m—实验室样品的质量数值，单位为克(g)。

取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.05%。

相关链接：添加剂维生素B2(核黄素)检验方法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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