A.3.4 定量分析

A.3.4.1 原理

试样中花生四烯酸(ARA)在氢氧化钾甲醇作用下，生成花生四烯酸(ARA)甲酯，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定，以内标法定量，结果以花生四烯酸(ARA)甘油三酯计。

A.3.4.2 试液的制备

A.3.4.2.1 花生四烯酸(ARA)油脂试样溶液的制备

称取0.04g试样(精确至0.0001g)于10mL容量瓶中，加入2.0mL十三碳烷酸甘油三酯内标储备液(A.3.1.9),以下按A.3.3.1“加入适量正庚烷(A.3.1.5)……取上层有机相溶液备用”操作。每份试液至少做两个平行样。

A.3.4.2.2 空白溶液的制备

除不加试样外按A.3.4.2.1所述方法进行处理。

A.3.4.3 标准工作溶液甲酯化处理

分别准确吸取A.3.1.10中系列标准工作溶液2mL于10mL带盖离心管中，以下按A.3.3.1自“加入0.2mL氢氧化钾甲醇溶液(A.3.1.7)……取上层有机相溶液备用”操作。

A.3.4.4 测定

A.3.4.4.1 气相色谱条件

a)色谱柱：DB-23(30.0m×0.25mm×0.25um)石英毛细管柱，或相当者；

b)柱温程序：90℃保持5min,9℃/min升至240℃,保持5min,3℃/min升至250℃；

c)载气：氮气(A.3.1.11)；

d)流速：1.33mL/min；

e)进样口温度：250℃；

f)进样模式：分流进样(分流比为1：100)；

g)检测器温度：300℃；

i)进样量：luL。

A.3.4.4.2 标准曲线的绘制

按A.3.4.4.1 所列测定条件，将甲酯化后的标准工作溶液依次进样，测量花生四烯酸(ARA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的峰面积。花生四烯酸(ARA)甲酯的峰面积与标准工作溶液中花生四烯酸(ARA)甘油三酯的浓度成正比。以标准工作溶液中花生四烯酸(ARA)甘油三酯的浓度(mg/mL)为横坐标，以花生四烯酸(ARA)甲酯与十三碳烷酸甲酯的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线。按公式(A.1)计算回归参数：

y=(a×x)+b.............(A.1)

式中：

y—花生四烯酸(ARA)甲酯与十三碳烷酸甲酯的峰面积比；

a—回归曲线的斜率；

x—标准工作溶液中花生四烯酸(ARA)甘油三酯的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；

b—回归曲线的截距。

A.3.4.4.3 试液的测定

将空白溶液(A.3.4.2.2)和试样溶液(A3.4.2.1)依次进样，扣除空白值，获得花生四烯酸(ARA)甲酯/十三碳烷酸甲酯的峰面积比。

A.3.4.5 结果计算

试样中花生四烯酸(ARA)甘油三酯的含量X1按式(A.2)

式中：

X1—试样中花生四烯酸(ARA)甘油三酯含量，%;

y—试液甲酯化后花生四烯酸(ARA)甲酯与十三碳烷酸甲酯的峰面积比；

a—回归曲线的斜率；

b—回归曲线的截距；

V—试液最终定容体积，单位为毫升(mL);

m—试样的质量，单位为毫克(mg)。

如含量以花生四烯酸(ARA)计，乘以换算系数0.9597。

计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留小数点后两位。

A.3.4.6 重复性

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(二)》

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