流动相处理技术
来源/作者:中国标准物质网  日期:2014-11-4 11:04:44

(1)溶剂的纯化

分析纯和优级纯溶剂在很多情况下可以满足色谱分析的要求,但不同的色谱柱和检测方法对溶剂的要求不同,如用紫外检测器检测时溶剂中就不能含有在检测波长下有吸收的杂质。除专供色谱分析用的“色谱纯”溶剂外,溶剂在使用前,最好要进行除去紫外杂质、脱水、重蒸等纯化操作。

乙腈是常用的溶剂,分析纯乙腈中常含有少量的丙酮、丙烯腈、丙烯醇和嗯唑等化合物,产生较大的背景吸收。可以采用活性炭或酸性氧化铝吸附纯化,也可采用高锰酸钾/氢氧化钠氧化裂解与甲醇共沸的方法进行纯化。

四氢呋喃中的抗氧化剂BHT可以通过蒸馏除去。四氢呋喃在使用前应蒸馏,长时间放置又会被氧化,因此最好在使用前先检查有无过氧化物。方法是取10m[。四氢呋喃和1mL新配制的10%碘化钾溶液,混合hlllln后,不出现黄色即可使用。

与水不混溶的溶剂(如三氯甲烷)中的微量极性杂质(如乙醇)、卤代烃中的HCl杂质可以用水萃取除去,然后再用无水硫酸钙干燥。

正相色谱中使用的亲油性有机溶剂通常都含有50~2000pg/ml的水。水是极性最强的溶剂,特别是对吸附色谱来说,使很微量的水也会因其强烈的吸附而占领固定相中很多吸附活性点,致使固定相性能下降。通常可用分子筛床干燥除去微量水。

卤代溶剂与干燥的饱和烃混合后性质比较稳定,但卤代溶剂(三氯甲烷、.四氯化碳)与醚类溶剂(乙醚,四氢呋喃)混合后发生化学反应,生成的产物对不锈钢有腐蚀作用,有的卤代溶剂(如二氯甲烷)与一些反应活性较强的溶剂(如乙睛)混合放置后会析出结晶。因此,应尽可能避免使用卤代溶剂或现配现用。

(2)流动相的脱气

流动相中往往因溶解有氧气或混入空气而形成气泡,气泡进火检测器后会引起检测信号的突然变化,在色谱图上出现尖锐的噪音峰。小气泡慢慢聚集后会变成大气泡,大气泡进人流路或色谱柱中会使流动相的流速变慢或不稳定,致使基线起伏。溶解氧常和一些溶剂结合生成有紫外吸收的化合物,在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭。

溶解气体也有可能引起某些样品的氧化降解和使其溶解从而导致pH值发生变化。凡此种种,都会给分离带来负面的影响。因此,液相色谱实际分析过程中,必须先对流动相进行脱气处理。

目前,常用的液相色谱流动相脱气方法有超声波振荡脱气、惰性气体鼓泡吹扫脱气以及在线(真空)脱气装置三种。

超声波振荡脱气的方法是将配制好的流动相连同容器一起放人超声水槽中,脱气10~20min即可。该法操作简便,又基本能满足日常分析的要求,目前被广泛采用。

惰性气体如氦气鼓泡吹扫脱气的效果好,其方法是将钢瓶中的氦气缓慢而均匀地通人贮液器里的流动相中,氦气分子将其他气体分子置换和顶替出去,流动相中只含有氦气。因氦气本身在流动相中的溶解度很小,而微量氦气所形成的小气泡对检测没有影响,从而达到脱气的目的。

在线真空脱气装置的原理是将流动相通过一段由多孔性合成树脂膜构成的输液管,该输液管外有真空容器。真空泵工作时,膜外侧被减压,分子量小的氧气、氮气、二氧化碳就会从膜内进入膜外而被排除。在线真空脱气装置的优点是町同时对多个流动相溶剂进行脱气。

(3)流动相的过滤

过滤是为了防止不溶物堵塞流路或色谱柱人口处的微孔垫片。流动相过滤可使用微孔玻璃漏斗,可除去3~4mm以下的固态杂质。但严格地讲,流动相应该采用特殊的流动相过滤器,用O.45mm以下微孔滤膜进行过滤后才可使用。滤膜分有机溶剂专用和水溶液专用两种。