A.4 维生素E琥珀酸钙含量的测定

A.4.1 方法提要

维生素E琥珀酸钙在乙酸的作用下，水解为维生素E琥珀酸酯，再通过高效液相色谱测定，外标法计算维生素E琥珀酸钙含量。

A.4.2 试剂和材料

A.4.2.1 无水乙醇。

A.4.2.2 乙酸。

A.4.2.3 甲醇。

A.4.2.4 维生素E琥珀酸酯标准品(Tocopherol acid Succinate，CAS：4345-03-3)。

A.4.2.5 α-生育酚标准品(Alpha Tocopherol，CAS：10191-41-0)。

A.4.2.6 乙酸溶液：1+5。

A.4.2.7 乙醇-乙酸溶液：9份无水乙醇与1份乙酸溶液(A.4.2.6)混合而成。

A.4.3 仪器和设备

高效液相色谱仪：配紫外检测器，或其他等效的检测器。

A.4.4 参考色谱条件

A.4.4.1 色谱柱：C₁₈柱，4.6mm×250mm，粒径5um。

A.4.4.2 流动相：甲醇：水：乙酸=972：1。

A.4.4.3 柱温：30℃。

A.4.4.4 流速：2.2mL/min。

A.4.4.5 检测波长：284nm。

A.4.4.6 进样量：20uL。

A.4.5 分析步骤

A.4.5.1 标准溶液的制备

称取维生素E琥珀酸酯标准品50mg(精确至0.0001g)，用乙醇-乙酸溶液(A.4.2.7)溶解并定容至50mL，摇匀，作为标准溶液。该标准溶液每毫升含有1mg维生素E琥珀酸酯。

A.4.5.2 试样溶液的制备

称取预先干燥(干燥方法见A.7)的试样50mg(精确至0.0001g)，用乙醇-乙酸溶液(A.4.2.7)溶解并定容至50mL，摇匀，作为试样溶液。

A.4.5.3 系统适用性试验

称取维生素E琥珀酸酯标准品50mg和α-生育酚标准品50mg，用乙醇-乙酸溶液(A.4.2.7)溶解并定容至50mL，摇匀，作为混合标准溶液。该溶液每毫升分别含有1mg维生素E琥珀酸酯和1mg α-生育酚标准品。采用A.4.4色谱条件下，多次进样，对混合标准溶液进行色谱分析。维生素E琥珀酸酯和α-生育酚分离度应不小于2.0。取混合溶液连续进样5次，维生素E琥珀酸酯峰面积的相对标准偏差不得大于0.8%。

A.4.5.4 测定

在A.4.4色谱条件下，分别对标准溶液和试样溶液进行色谱分析。根据标准溶液和试样溶液色谱图中维生素E琥珀酸酯峰面积，按式(A.1)计算出试样中维生素E琥珀酸钙含量。

A.4.6 结果计算

维生素E琥珀酸钙含量的质量分数w1，按式(A.1)计算：

式中：

m_s——标准溶液中维生素E琥珀酸酯的质量，单位为毫克(mg)；

m_t——试样的质量，单位为毫克(mg)；

A_t——试样溶液色谱图中维生素E琥珀酸酯的峰面积；

A_s——标准溶液色谱图中维生素E琥珀酸酯的峰面积；

1099.6——维生素E琥珀酸钙的摩尔质量；

1061.6——维生素E琥珀酸酯的摩尔质量。

以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的2%。

A.5 碱度的测定

A.5.1 试剂和材料

A.5.1.1 乙醚。

A.5.1.2 盐酸：36%～38%。

A.5.1.3 盐酸标准滴定溶液：c(HCl)=0.1mol/L。

A.5.1.4 酚酞指示液：10g/L。

A.5.2 分析步骤

称取试样0.20g，加10mL乙醚，2mL水，数滴酚酞指示液和0.1mL的0.1mol/L盐酸溶液，摇匀。水层应不显红色。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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