有机氯类农药是一类组成上含有氯原子的有机杀虫、杀菌剂，主要分为两大类：一是以滴滴涕、六六六、五氯硝基苯为代表的氯代苯类；另一类是以艾试剂、狄试剂、七氯为代表的氯化甲撑萘类。有机氯类农药曾是使用历史最长，使用量最大的一类农药，由于其具有高效、广谱、价廉、易于生产等特点，在农业生产及卫生防护中曾被广泛使用。但由于有机氯农药具有高度稳定性，残留期很长，对自然环境和食物链已造成了严重污染，目前在世界范围内许多有机氯农药已被禁止使用。我国于1983年即停止生产和使用滴滴涕和六六六，但由于其在土壤中残留半衰期在10年以上，有生物积累作用，目前在中草药中仍会有痕量检出，这类农药的残留分析始终具有特殊的意义。

《中国药典》收录的滴滴涕、六六六、五氯硝基苯农药残留测定法，系采用经典的盐析法提取、磺化法净化、毛细管气相色谱分离、ECD检测器检测。

(一) 试验准备

1. 对照品国家标准物质研究中心提供所需的农药对照品。通常首先配制成浓度均为1ug/ml的对照品混合储备溶液，可密封后于冰箱中短期保存。临用时，按药典要求制备成不同浓度系列的混合对照品溶液。

2. 溶剂有机氯农药残留测定属痕量分析，对溶剂的纯度要求较高，一般应使用农药残留级试剂。采用普通试剂时，可进行重蒸馏，再取50～100ml，浓缩至1ml，进样测定，应无明显的干扰杂质峰。

3. 器皿为保证基线稳定，空白无干扰，试验用到的器皿应严格清洗，但不建议使用含卤素的洗涤剂。

(二)有机氯类农药残留量测定法(药典收载)

1.9种有机氯类农药残留量测定法

(1) 色谱条件与系统适用性试验：以(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5%苯基)甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30mx0.32mm×0.25um)，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度230℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序升温初始100℃，每分钟10℃升至220℃，每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。理论板数按α-BHC峰计算应不低于1×10⁶，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

(2) 对照品储备液的制备：精密称取六六六(BHC)(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)、滴滴涕(DDT)(p,p'-DDE，p,p'-DDD，o,p'-DDT，p,p'-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)农药对照品适量，用石油醚(60～90℃)分别制成每1ml约含4～5ug的溶液，即得。

(3) 混合对照品储备液的制备：精密量取上述各对照品储备液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。

(4) 混合对照品溶液的制备：精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚(60～90℃)制成每1L分别含0ug、1ug、5ug、10ug、50ug、100ug、250ug的溶液，即得。

(5) 供试品溶液的制备药材或饮片：取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30ml，称定重量，超声15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置(使分层)，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚(60～90℃)溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀释至5ml，小心加入硫酸1ml，振摇1分钟，离心(3000转/分)10分钟，精密量取上清液2ml，置具刻度的浓缩瓶(图13-3)中，连接旋转蒸发器，40℃下(或用氮气)将溶液浓缩至适量、精密稀释至1ml，即得。

图13-3刻度浓缩瓶

(6) 制剂：取供试品，研成细粉(蜜丸切碎，液体直接量取)，精密称取适量(相当于药材2g)，以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供：1.0ml试品溶液。

(7) 测定法：分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1ul，注入气相色谱仪，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量(图13-4)。

图13-4 人参样品中有机氯类农药残留量测定
(OV-1701柱，对照品图谱中各农药依次为：α-BHC，PCNB，γ-BHC，β-BHC，δ-BHC，pp'-DDE，op'-DDT，pp'-DDD.pp'-DDT)

2.22 种有机氯类农药残留量测定法

(1) 色谱条件及系统适用性试验：分析柱以50%苯基50%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)，验证柱以100%二甲基聚硅氧烷为固定液的弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)，63Ni-ECD电子捕获检测器。进样口温度240℃，检测器温度300℃，不分流进样，流速为恒压模式(初始流速为1.3ml/min)。程序升温初始70℃，保持1分钟，每分钟10℃升至180℃，保持5分钟，再以每分钟5℃升至220℃，最后以每分钟100℃升至280℃，保持8分钟。理论板数按α-BHC计算应不低于1×10，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

(2) 对照品储备液的制备：精密称取表13-1中农药对照品适量，用异辛烷分别制成如表13-1中浓度，即得。

表13-1 22种有机氯类农药对照品储备液浓度、相对保留时间及检出限参考值

注：各对照品的相对保留时间以硫丹硫酸盐为参照峰计算。

(3) 混合对照品储备液的制备：精密量取上述对照品储备溶液各1ml，置100ml量瓶中，用异辛烷稀释至刻度，摇匀，即得。

(4) 混合对照品溶液的制备：分别精密量取上述混合对照品储备液，用异辛烷制成每1L分别含10ug、20ug、50ug、100pg、200ug、500pg的溶液，即得(其中β-六六六、异狄氏剂、p,p'-滴滴滴、o,p'-滴滴涕每1L分别含20ug、40ug、100ug、200ug、400ug、1000ug)。

(5) 供试品溶液的制备：取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)，取约1.5g，精密称定，置于50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入水10ml，混匀，放置2小时，精密加入乙腈15ml，剧烈振摇提取1分钟，再加入预先称好的无水硫酸镁4g与氯化钠5g的混合粉末，再次剧烈振摇1分钟后，离心(4000转/min)1分钟。精密吸取上清液10ml，40℃减压浓缩至近干，用环己烷-乙酸乙酯(1：1)混合溶液分次转移至10ml量瓶中，加环己烷-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液至刻度，摇匀，转移至预先加入1g无水硫酸钠的离心管中，振摇，放置1小时，离心(必要时滤过)，取上清液5ml过凝胶渗透色谱柱[400mm×25mm，内装BIO-BeadsS-X3填料；以环己烷-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液为流动相；流速为每分钟5.0ml]净化，收集18～30分钟的洗脱液，于40℃水浴减压浓缩至近干，加少量正己烷替换两次，加正己烷1ml使溶解，转移至弗罗里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml，用正己烷-丙酮(95∶5)混合溶液10ml和正己烷10ml预洗]上，残渣用正己烷洗涤3次，每次1ml，洗液转移至同一弗罗里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮(95：5)混合溶液10ml洗脱，收集全部洗脱液，置氮吹仪上吹至近干，加异辛烷定容至1ml，涡旋使溶解，即得。

(6) 测定法：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1ul，注入气相色谱仪，按外标标准曲线法计算供试品中各农药残留量。

(7) 限度：除另有规定外，每1kg中药材或饮片中含总六六六(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC之和)不得过0.2mg；总滴滴涕(p，p'-DDE，p,p'-DDD，o,p'-DDT，p,p'-DDT之和)不得过0.2mg；五氯硝基苯(Quintozene)不得过0.1mg；六氯苯(Hexachlorobenzene)不得过0.1mg；七氯(Heptachlor)、顺式环氧七氯(Heptachlor-exo-epoxide)和反式环氧七氯(Heptachlor-endo-epoxide)之和不得过0.05mg；艾氏剂(Aldrin)和狄氏剂(Dieldrin)之和不得过0.05mg；异狄氏剂(Endrin)不得过0.05mg；顺式氯丹(cis-Chlordane)、反式氯丹(trans-Chlordane)和氧化氯丹(oxy-Chlordane)之和不得过0.05mg；α-硫丹(α-Endosulfan)、β-硫丹(β-Endosulfan)和硫丹硫酸盐(Endosulfansulfate)之和不得过3mg。

【附注】

(1) 当供试品中有农药检出时，可在验证柱中确认检出的结果，再进行定量。必要时，可用气相色谱-质谱法进行确证。

(2) 加样回收率应在70%～120%之间。

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。