五、挥发油的含量测定

挥发油的含量测定可分为总挥发油和单一挥发油的含量测定。总挥发油的含量测定，采用挥发油提取器，用蒸溜法测定，可分别测定相对密度在1.0以下和1.0以上挥发油的含量。

中药中所含挥发油均为混合物，常由十几种乃至上百种化合物组成，因此，在进行单一成分含量测定时，分离是关键。色谱法是挥发油成分的主要分析方法，尤其是气相色谱和薄层色谱。

气相色谱法除另有规定外，色谱系统的适用性试验同2015年版《中国药典》四部高效液相色谱法(通则0512)项下的规定，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求(详见第九章高效液相色谱法)

(一) 测定方法

1. 内标法内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。

内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱所分离，又不受试样中其他组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。

2. 外标法中药制剂组成复杂，若使用内标法，会增加分离的难度，其组分很容易干扰内标峰，所以中药制剂含量测定中，当组成相对简单，杂质不干扰内标峰时，才使用内标法。外标法是仪器分析常用的方法之一，是比较法的一种。与内标法相比，外标法不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性。

若标准曲线过原点，测定组分含量变化不大，可使用外标一点法。由于中药制剂中测定组分含量波动范围较大，所以最好采用标准曲线定量。

3. 面积归一化法面积归一化法，是一种常用的色谱定量方法。面积归一化法是把样品中各个组分的峰面积乘以各自的相对校正因子并求和，此和值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”样品中某组分的百分含量可用下式计算：

pt%=A₁f₂/(A₁f₂+A₂f₂+…A_nf_n)×100%...........(式14-16)

式中，f₁、f₂、f_n为各组分的相对校正因子；A₁、A₂、A_n为各组分的峰面积。如果操作条件稳定，也可以用峰高归一化法定量，此时组分的百分含量可按下式计算：

pt%=h₁f₁/(h₁f₁+h₂f₂+…h_nf_n)×100%...............(式14-17)

式中，f₁、f₂、f_n为各组分在该操作条件下特定的峰高相对校正因子；h₁、h₂、h_n为各组分的峰高。用归-化法定量时，必须保证样品中所有组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰。

上述方法的规定均同2015年版《中国药典》四部高效液相色谱法(通则0512)项下的相应规定。

4. 标准溶液加入法标准加入法，又名标准增量法或直线外推法，是一种被广泛使用的检验仪器准确度的测试方法。这种方法尤其适用于检验样品中是否存在干扰物质。当很难配制与样品溶液相似的标准溶液，或样品基体成分很高，而且变化不定或样品中含有固体物质而对吸收的影响难以保持一定时，采用标准加入法是非常有效的。

精密称(量)取某个杂质或待测成分对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定杂质或主成分含量，再扣除加入对照品溶液的含量，即得供试品溶液中某个杂质和主成分含量。

标准曲线法适用于标准曲线的基体和样品的基体大致相同的情况，优点是速度快，缺点是当样品基体复杂时不正确。标准加入法可以有效克服上面所说的缺点，因为此方法是把样品和标准混在一起同时测定的(“标准加入法”的叫法就是从这里来的)，但缺点是速度很慢。

(二) 计算公式

加入对照品溶液前后校正因子影响相同，即：

则待测组分的浓度cx可通过下式计算：

式中，cx为供试品中组分X的浓度；Ax为供试品中组分X的色谱峰面积；△cx为所加入的待测组分对照品的浓度；Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。

(三) 注意事项

1. 由于气相色谱法的进样量一般仅数微升，为减少进样误差，尤其当采用手工进样时，由于留针时间和室温等对进样量也有影响，故采用内标法定量为宜。

2. 当采用自动进样时，由于进样量重复性的提高，在保留分析误差的前提下，也可采用外标法定量：

3. 当采用顶空进样时，由于供试品和对照品处于不完全的基质中，故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响。

4. 当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。

5. 由于中药制剂组成复杂，分析时应在分析柱前加预柱。分析完毕后一般用水或低浓度的醇水先洗去糖等水溶性杂质，再用甲醇等有机溶剂将色谱柱冲洗干净。

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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