六、多糖的含量测定

在自然界糖和它的衍生物分布很广，无论在动物界或植物界都有它们的存在。糖以不同的形式出现，具有不同的功能。过去对糖的认识，只认为糖是一种贮藏养料，如动物体内的糖原、肝糖原，植物体内的淀粉、菊糖、树胶、果胶、黏液质等，或是植物和某些动物的支持组织。这类成分大多无生物活性，有的在提取有效成分和制剂中往往把它们作为杂质而除去。近20年来，对糖有了新的认识，许多糖类具生物学功能，糖类的免疫和调节作用，用来治疗一些疾病。例如茯苓有利水渗湿、健脾补中等作用，它的主要成分为β-茯苓多聚糖(β-pachyman)，此多糖属于β(1→3)葡聚糖；白及含有的黏液质可作为代血浆的原料；海藻中含有一种多糖类物质，系由β-D-甘露糖醛酸所组成的长链大分子化合物，其钠盐可溶于水形成高黏度的溶液，其黏度随该大分子的降解而降低，适当降解后的低聚海藻酸钠的水溶液可作为代血浆使用；据最近国内外陆续报道。在高等植物及菌类中发现有显著抗癌作用的多糖，如酵母、蛇舌草、甘蔗渣、麦秆、藻类、地衣等。对多糖的络合物的分离有了新的进展，多糖类的药物制剂相继问世，如树舌多糖、云芝多糖、猴头多糖、香菇多糖等。

多糖类是指10个分子以上的单糖脱水形成的高聚物。对于多糖的含量测定方法有比色法、柱色谱法、超滤法、透析法、凝胶过滤法、立体排斥色谱法、液相色谱法、伯川法等。紫外-可见分光光度法也有较多应用。

七、木脂素类成分的含量测定

总木脂素成分含量测定方法可采用变色酸比色法、二阶导数光谱法及柱色谱-比色法等。变色酸比色法是根据某些木脂素成分，其结构中亚甲二氧基与变色酸/浓硫酸试剂反应产生颜色进行比色测定含量，本方法要求供试液纯度较高。

单体木脂素成分的含量测定方法主要有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法等。其中分光光度法需要对样品进行净化处理，如用化学方法、柱色谱法及薄层色谱法等分离技术，以排除共存杂质的干扰。薄层色谱法，一般可用吸附柱色谱法，以硅胶为吸附剂，用低极性溶剂展开。由于木脂素类成分均具有紫外吸收，可直接用紫外光谱法测定。单体木脂素成分含量测定方法可采用高效液相色谱法，一般是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水或甲醇-水为流动相的反相色谱法，多采用紫外检测器。高效液相色谱法得到广泛应用。

八、香豆素类成分的含量测定

含香豆素类成分的中药很多，该类成分定量方法有比色法、荧光光度法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。

可利用香豆素类成分的颜色反应，生成有色物质，于可见光区进行测定。可在样品中加入重氮化试剂，生成紫色偶氮颜料，于530nm处进行测定。香豆素类成分都具有紫外吸收，样品较纯净时，可于紫外光区直接测定。在复方制剂中，由于成分复杂，可先用薄层层析进行分离，在荧光下定位，找出香豆素类成分，将薄层板刮下，用溶剂洗脱，再加入重氮化试剂，进行比色测定。

薄层色谱法是香豆素类成分常用的测定方法之一。样品经薄层分离后，于荧光下定位，利用香豆素类成分具有紫外吸收或能产生荧光的特性，不经过显色，直接进行扫描测定。羟基香豆素类成分大多能产生较强烈荧光，用荧光光度法测定，灵敏度较高。香豆素类成分含有芳香环，及其他共轭结构，可采用高效液相色谱法进行测定，具有较高的灵敏度。某些分子量较小、具有挥发性的香豆素类成分，可用气相色谱法测定。高效液相色谱法应用也较多。

九、其他成分的含量测定

有机酸类成分的含量测定在水溶液中滴定突跃不明显，可用非水溶液滴定法。滴定液颜色较深时，影响观察滴定终点，采用电位法指示终点。

芳香族酸类和其他具有紫外吸收的酸类，可用高效液相色谱法进行含量测定，如绿原酸、没食子酸、桂皮酸、丹参素、阿魏酸等。
脂肪酸类、萜类等一些不具有紫外吸收的酸类物质可用薄层色谱分离，再选用合适的显色剂，显色后测定。

脂肪酸类如苹果酸、丁二酸、丙二酸、枸橼酸、酒石酸可用溴酚蓝、溴甲酚绿等pH指示剂为显色剂；萜类物质如熊果酸、齐墩果酸可以硫酸乙醇、磷钼酸试剂等为显色剂。可产生荧光的化合物可薄层分离后用荧光法测定，如阿魏酸、绿原酸等化合物。

分光光度法可用单波长法、双波长法、导数分光光度法测定有机酸的含量；也可加显色剂显色后再进行测定(如齐墩果酸可用香草醛-冰醋酸显色)，或用薄层、柱层析分离后再进行测定；如口蜂王酸的含量测定，用聚酰胺进行分离，再浸入0.05%罗丹明B的水溶液中5～10分钟，蜂王酸显深红色，将深红色的斑点剪下，浸泡在95%乙醇-冰醋酸-水(45：5：50)的混合洗脱液中，洗脱30分钟，于560nm波长处测定。

其他没有紫外吸收的化合物可用超临界流体色谱法定量，如用超临界流体色谱法测定齐墩果酸的含量；也可用高效毛细管电泳法，如用高效毛细管电泳法(电导检测器)测定柠檬酸、苹果酸的含量；有些化合物可用衍生化法使生成具有挥发性的化学衍生物，用气相色谱法测定，如17-亚麻酸，在碱性条件下，同三氟化硼-甲醇试剂反应生成卜亚麻酸甲酯，用气相色谱法测定；蜂王酸(10-羟基-2-癸烯酸)在三氟化硼的催化下，甲醇与10-羟基-2-癸烯酸在一定条件下进行甲基化反应，生成甲基化衍生物，用气相色谱法测定。薄层扫描法在这方面的应用也比较广泛，此处不再赘述。

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文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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