孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿。 它既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水,溶液呈蓝绿色。研究结果表明,孔雀石绿具 有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用。鉴于孔雀石绿的危害性,我国将 孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》。

以往，孔雀石绿残留量测定采用液相色谱法，其操作复杂，需要专业实验人员， 仪器工作环境要求高，不能满足现场检测需求。与此相比，孔雀石绿定性快速检测 试剂盒法的检测步骤较简单，技术条件要求低,大大缩短了测定时间，同时也降低 了检测成本。

［速测原理］

水产品中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物无色孔雀石绿、无色结晶紫经过前 处理后，样液经过孔雀石绿专用SPE小柱富集形成有色环带,可初步判断样品中是 否含有有色孔雀石绿、结晶紫。用洗脱剂将柱上待检物洗脱下来,经柱衍生化后， 加萃取剂，若萃取剂有明显的绿色或紫色说明样品中含有待检物质。将萃取剂取 出滴于白色点滴板上，可在板上形成绿色或紫色环斑,从而可准确定性样品中是否 含有孔雀石绿或结晶紫。

［速测范围］

本法用于检测鱼类、虾类等水产品中孔雀石绿、结晶紫、无色孔雀石绿、无色结 晶紫成分,适用于市场监督部门、水产监督部门对水产品的现场及化验室检测 监控。

本方法使用的试验材料由北京中卫食品科技公司、广州天河绿洲生化研究中 心提供。

［操作方法］(实验室快速按照A,现场快速按照B)

(1)样品处理

A：取水产品可食部分用绞肉机绞碎后，准确称取10.0g于100mL离心管中， 加入提取剂1、提取剂2各一瓶，振摇5min后,4000r/min离心5min,取上清液 10mL于100mL量筒中，用蒸惘水定容至30mL；

B：用剪刀剪取约10g样品于研钵中，加入一瓶提取剂2研碎后，再加入一瓶提 取剂1继续研磨3 ~5min,用滤纸过滤后挤干残渣，收集滤液10mL于100mL量筒 中，用蒸馅水定容至30mL。

(2)层析柱激活 层析柱在使用前依次加入2mL洗脱剂、5mL蒸惟水，吸耳 球上加压，废液舍弃。

(3)过层析柱 将50mL注射器与层析柱连接，将步骤(1)中收集到的样液倒入注射筒里,用注射塞加压，加快流速，建议30mL样本通过柱子的时间为5 ~8min,待样液完全流干，弃去流出液，然后依次加2mL洗涤剂及2mL蒸慵水于层析柱中,吸耳球上加压，废液舍弃。

［结果判断］

(1)结果初判观察层析柱中吸附剂颜色变化，若吸附剂逐渐形成绿色环带,可初步判断样本中含有孔雀石绿;若吸附剂逐渐形成紫色环带，可初步判断样本中含有结晶紫;加0.8mL洗脱液于层析柱中，吸耳球上加压，用离心管1收
集流出液，根据液体颜色来判断。

(2)衍生化 依次加2mL洗脱液及2mL蒸馅水于层析柱中，吸耳球上加压，废液舍弃，将一瓶衍生化试剂倒入层析柱中，加入2mL蒸馅水用吸耳球从上口加压挤干;弃去流出液，将步骤(1)中离心管1的洗脱液加入柱中，吸耳球上加压，用离心管2收集流出液，再用0.8m洗脱液于层析柱中,吸耳球上加压，用此离心管2收集混匀。

(3)萃取 取步骤(2)中的离心管2,加入0.5mL蒸馋水后,再加入0.5mL萃取剂，扣上管塞混匀静置，离心管2下层若有明显的绿色或紫色则可判断样品中含有孔雀石绿或结晶紫，若无明显的绿色或紫色需进一步的判断。

(4)检测 用ImL注射器取步骤(3)中离心管2中的下层萃取液(注意不要吸到上层的液体)，加到白色点滴板的一个孔上,样液渐渐挥干，若在孔上形成绿色斑环说明样品中含有孔雀石绿，形成紫色斑环说明样品中含有结晶紫。

相关链接：水产品双氧水的快速检测(SFDA法，HX016)

文章来源：《食品快速检测实训教程》

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