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基质固相分散萃取方法和基本原理

发布时间:2014-11-18 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:553

在固相萃取中,通常要求样品是流动性液体。如果样品的黏稠度大、或者样品中存在许多颗粒状物质,就不能直接采用常规的固相萃取装置对样品进行前处理。在这种情况下,要对样品进行适当的稀释、过滤后才能进行正常的固相萃取操作。

为了加快并简化样品前处理的过程,提高样品前处理的效率,Barker等在1989年首次提出了基质固相分散(matrix so1id plaase dispersion,MSPD),并将其应用于哺乳动物组织中目标化合物的萃取。与经典的固相萃取装置不同,MSPI)萃取是将样品与固相吸附剂(C18、硅胶等)一起研磨之后,使样品成为微小的碎片分散在固相吸附剂表面。然后将此混合物装入空的SPE柱或注射针筒中,用适当的溶剂将目标化合物洗脱下来。

MSPI)萃取技术的主要优点有:适用于固体、半固体及黏稠样品的萃取;萃取溶剂与目标化合物的接触面增大,有利于目标化合物的萃取;溶剂完全渗入样品基质中,提高了萃取效率;使用的萃取溶剂比传统的LLE减少约95%,而且所需样品量小、萃取速度也比LLE快约90%。

MSPD萃取方法已经被广泛应用于多种固体、半固体及黏稠样品的萃取。

经典的MSPD萃取是将2 g固体吸附剂放入无孔的玻璃、铝或玛瑙研磨盆中,并将0.5 g或0.5 mL样品倒在载体上面。然后用磨棒进行温和的研磨,大约30~45 s样品基本分散在载体表面。

将研磨好的样品/吸附剂转移至有塞片或滤纸的空SPE柱或玻璃注射针筒中,也可以根据需要将样品/吸附剂转移至装有吸附剂的SPE柱(例如,弗罗里硅土SPE柱)中。弗罗里硅土SPE柱的作用是吸附:MSPD共流出干扰物以达到样品净化的目的。也可以将MSPD柱叠加在SPE净化柱之上进行洗脱。干燥的弗罗里硅土不但可以对MSPD洗脱物进行净化,还可以除去洗脱物中的水分。通常每种洗涤或洗脱溶液的用量为8 mL。洗脱可以利用重力进行,为了提高样品处理的通量,也可以加以真空或正压。洗脱通常是用不同的溶剂按一定的顺序进行,可以按照溶剂的极性大小,由低极性至高极性顺序洗脱,分别收集每个溶剂组分。例如按照正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲醇、水的顺序洗脱。为了减少杂质对目标化合物的干扰,有时也需要对萃取柱进行洗涤或对萃取物进行进一步的净化。

我们以C18键合硅胶为例来看一下MSPD的萃取过程。C18固相吸附剂是作为研磨剂加入到固态或黏稠样品中,通过研磨的剪切力将样品的结构破坏。C18键合有机相起到了溶剂的作用,将样品组分溶解并分散在固相载体表面。通过电子显微镜可以看到基质固相分散的效果。C18载体颗粒,可以清楚地看到不规则键合硅胶的具有多棱角的锋利边缘,在进行研磨时可以对固体样品进行剪切。可以看到,虽然样品组织已经被剪切成许多小碎片,但细胞成分并没有被破坏。

为了更好地解释MSPD的过程,我们假定一个MSPD的模式。样品中的各组分是按其极性分布的,非极性组分分散在吸附剂的非极性相,而极性组分和水分子则与C18吸附剂表面的硅羟基作用。扫描电镜显示当样品与固相填料的比例为1:4(质量比)时,样品相当均匀地分散在固相填料表面大约100A厚的层面上。也就是说,这时的样品已经变成为“固相填料”的一部分,可以十分方便地装柱并进行洗脱。

虽然MSPD使用的吸附剂与固相萃取吸附剂相同,但其分离机理与经典的固相萃取有显著的不同。首先,在固相萃取中要求样品必须是流体状液体样品,而MSPD萃取是直接针对半固体或黏稠液体样品的;另外,固相萃取中与吸附剂作用的样品组分和.MSPD分散在吸附剂表面的样品基质有很大的不同。在MSPD中,对加人吸附剂的样品进行研磨是将常规的样品液化、匀化、组织细胞裂解、提取、净化的过程一次完成,避免了传统样品前处理过程中沉淀、离心、过滤等过程造成目标化合物的损失。在MSPD中,样品各组分、目标化合物与载体之间的相互作用可以归纳为以下几种,而且这几种作用力在:MSPD中是同时发生的。

(a)目标化合物与固相载体之间作用;

(b)目标化合物与载体键合相之间作用;

(c)目标化合物与分散样品组分之间作用;

(d)其他样品组分与吸附剂之间作用;

(e)其他样品组分与吸附剂键合相之间作用;

(f)洗脱溶剂与上述所有成分之间的作用。

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