11.2.1.7 分析条件的选择

(1)提取液选择

喹诺酮类药物为酸碱两性物质，其提取方法可分为3种主要类型，-种是在中性条件下用有机溶液萃取，这类药物也可以在碱性条件下提取，如用氨水乙腈溶液提取，还可以在酸性条件下提取，如采用乙酸乙腈溶液等。基体中的水分对喹诺酮类药物的提取有影响，本方法曾先后参照文献，采用了10%氨水乙腈溶液、1%乙酸乙腈溶液及乙腈进行提取，结果发现，对于鳗鱼及制品中喹诺酮类药物的提取，这三种溶剂在提取效率上无明显差异，本方法选用乙腈作为提取溶剂。由于鳗鱼肉质脂质含量较高，在提取时易结团，故需加入无水硫酸钠。

(2) 净化条件选择

酸-碱液液萃取是净化喹诺酮类药物的基本方法，如可通过调节pH后采用氯仿等有机溶剂萃取以达到净化目的。近年来，固相萃取成为动物源性食品中药物残留分析的主要净化方式，有多种商品化固相萃取小柱可以选择。对于喹诺酮类药物，有报道采用正相固相萃取小柱如氰基柱、氨基柱及离子交换小柱如羧基柱、苯磺酸柱等。近年来使用较多的净化方式为将提取溶剂上柱，强阳离子交换小柱净化、氨水甲醇洗脱。

在试验中发现若直接采用乙腈提取液上柱,嘔喹酸、萘啶酸及氟甲喹不能完全被固相萃取小柱吸附，因此，在采用乙腈提取后需要将有机相换为乙酸铵溶液过柱净化以提高回收率。试验发现，采用甲醇即可较完全洗脱嗯喹酸、萘啶酸与氟甲喹，而对于其他12种喹诺酮类残留则需要采用氨水甲醇洗脱。在制作了淋洗曲线后，确定了洗脱液先后为1.5mL甲醇、3mL25%氨水甲醇依次洗脱(表11-6)。

表11-6 洗脱液体积与回收率(%)关系

(3)质谱条件优化

采用注射泵直接进样方式，以8μL/min将15种喹诺酮类药物的标准溶液分别注入串联质谱的离子源中。采用正离子扫描方式进行一-级质谱分析，确定了准分子离子峰(M+1)，优化了去集簇电压。

对被测物的准分子离子碰撞后，进行二级质谱分析，得到子离子质谱图，优化了碰撞能量，此外，还对离子源温度、雾化气、气帘气、辅助气等参数进行了优化。

(4)色谱条件选择

采用多反应监测模式的液相色谱-串联质谱仪进行分析时，并不要求各组分在液相色谱上进行完全分离，但由于氟甲喹与咽喹酸两种物质的相对分子量-致，且丰度最大的子离子亦-致，因而这两种物质的完全分离尤为重要。本方法选择了YMC Pack Pro C₁₈柱(150mm×2.1mm，5um)与Agillent ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈柱(150mm×4.6mm，5μm)进行了试验，选择了洗脱条件，试验证明，在梯度洗脱条件下这15种物质均能较好分离。

(5)喹诺酮类药物的稳定性

喹诺酮类药物较稳定，有资料表明如恩诺沙星、氟甲喹、嗯喹酸、沙拉沙星等药物在鱼皮中浓度含量较高，因而在制样时考忠到需要将鱼皮与鱼肉混合匀浆。鉴于鳗鱼皮难以搅碎，因而采用微波加热的方式。本方法试验了在中高功率(功率为500W)微波加热30s、1min、1.5min三种条件下喹诺酮类药物的稳定性，试验证明，在该功率下，30s与1min的加热时间不会破坏喹诺酮类药物的稳定性，同时经加热后鱼皮可以容易地与鱼肉一并进行匀浆，故在样品制备时，采用中高功率加热30s。

喹诺酮类药物高浓度的贮备液在甲醇中可保存3个月以上，但水相中低浓度工作液极易降解，应临用时现配。由于如诺氟沙星等一些喹诺酮类药物对光不稳定，应避光存放，同时在操作过程中要尽可能使用棕色玻璃器皿。

另外，试验中还发现氮吹时的温度对一些喹诺酮类药物的回收率有影响，温度过高回收率有所下降，建议浓缩时的温度不超过40℃。

文章来源：《兽药多组分残留分析技术》

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