液相色谱串联质谱法测定牛奶和奶粉中7种喹诺酮类药物残留量
来源/作者:中国标准物质网  日期:2021-09-14

11.2.3.1 适用范围

适用于牛奶和奶粉中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星残留检测的制样和液相色谱-串联质谱测定。方法检测限:牛奶中恩诺沙星、达氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星、奥比沙星、二氟沙星和麻保沙星均为1μg/kg;奶粉中恩诺沙星达氟沙星环丙沙星沙拉沙星奥比沙星二氟沙星麻保沙星均为4ug/kg。

11.2.3.2 方法原理

试样用乙腈磷酸盐缓冲溶液提取,OasisHLB固相萃取柱净化,5%氨水甲醇溶液洗脱,液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。

11.2.3.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、磷酸、甲酸:色谱纯;磷酸氢二钠(Na2HPO4:12H2O)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、氨水:优级纯。
磷酸盐缓冲溶液(0.05mol/L):称取5.68g磷酸氢二钠和1.36g磷酸二氢钾,放入1000mL烧杯中,加入800mL水溶解,用磷酸调至pH=3.0,再用水定容至1000mL。

5%氨水甲醇溶液:吸取50mL氨水与950mL甲醇混合;甲酸溶液(pH=3.0):量取500mL水,用甲酸调pH到3.0;25%甲醇溶液:量取250mL甲醇用水稀释到1000mL。

甲醇-甲酸溶液(15+85,v/v):量取30mL甲醇与170mL甲酸溶液混合。

标准物质纯度:≥95%。

标准储备溶液:0.1mg/mL。准确称取适量的每种标准物质,用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备溶液,该溶液在4℃保存。

混合标准中间溶液:1μg/mL。分别吸取1mL标准储备溶液放入100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。该溶液在4℃保存。

混合标准工作溶液:根据需要用空白样品提取液配不同浓度的混合标准工作溶液,混合标准工作溶液在4℃保存。

OasisHLB固相萃取柱或相当者:60mg,3mL。使用前分别用5mL甲醇和5mL水和5mL磷酸盐缓冲溶液活化,保持柱体湿润。

11.2.3.4 仪器和设备

液相色谱-串联四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源;分析天平:感量0.1mg和0.01g;涡旋振荡器;固相萃取装置;氮气吹干仪;真空泵:最大负压80kPa;pH计:测量精度±0.02pH单位;贮液器:通过转接头连接于OasisHLB固相萃取柱上;离心机;旋转蒸发仪;具刻度离心管:10mL。

11.2.3.5 样品前处理

(1) 试样制备

将牛奶从冰箱中取出,放置至室温,摇匀,备用。牛奶置于4℃冰箱中避光保存,奶粉常温避光保存。

(2)提取

a.牛奶样品:称取2g试样,精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中,加入10mL乙腈,于涡旋振荡器振荡提取1min,5000r/min离心5min,.上清液过滤到鸡心瓶中,在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液,10mL乙腈,重复以上步骤,合并上清液,于50℃旋转蒸发,至乙腈全部蒸出。加入5mL磷酸盐缓冲溶液,混匀。

b. 奶粉样品:称取0.5g试样,精确到0.01g,置于50mL具塞塑料离心管中,加入6mL磷酸盐缓冲溶液,涡旋混匀,再加入10mL乙腈,于涡旋振荡器振荡提取1min,5000r/min离心5min,上清液过滤到鸡心瓶中,在残渣中加入5mL磷酸盐缓冲溶液,10mL乙腈,重复以上步骤,合并上清液,于50℃旋转蒸发,至乙腈全部蒸出。加入5mL磷酸盐缓冲溶液,混匀。

(3) 净化

将提取步骤所得的样液转移到贮液器中,再用5mL磷酸盐缓冲溶液洗鸡心瓶,洗液合并到贮液器,以约1mL/min的流速全部过HLB固相萃取小柱,待样液完全流出后,先后以4mL水、4mL 25%甲醇水溶液淋洗,抽干,用4mL 5%氨水甲醇溶液洗脱于10mL具刻度离心管中,洗脱液于50℃,氮气吹至约0.2mL时停止浓缩,用甲醇-甲酸溶液定容至1mL,5000r/min离心5min,过0.2μm滤膜,供液相色谱串联质谱分析。

(4) 空白基质溶液的制备

将取牛奶阴性样品2g,奶粉阴性样品0.5g,按上述提取净化步骤操作。

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文章来源:《兽药多组分残留分析技术》

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【关键词】磷酸盐 乙腈 二氟沙星 奥比沙星 沙拉沙星 环丙沙星 麻保沙星 恩诺沙星 磷酸氢二钠