1．无菌操作

接种时由于有一个敞口的过程，所以是极易引起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起，接种室要严格进行空问消毒。接种室内保持定期用1％～3％的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗。除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外，还可在使用期间用70％的酒精或3％的来苏儿喷雾，使空气中灰尘颗粒沉降下来。无菌操作可按以下步骤进行。

(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；

(2)在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；

(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿专用拖鞋等；

(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面；

(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；

(6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；

(7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5d要大强度灭菌一次。

2．接种

接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块，放入培养基的过程。以上已叙述接种前的材料表面的消毒灭菌，现将接种前后的程序连贯地介绍。

(1)将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭好菌的4层纱布上或滤纸上。

(2)材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪子或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0．5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含l～2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。

(3)用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。具体操作过程是：先解开包口纸，将试管几乎水平拿着，使试管口靠近酒精灯火焰的外焰部分，并将管口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。若用棉塞盖口，可先在管口外面灼烧。去掉棉塞，再烧管口里面。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻捕入培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1~3块为宜。至于材料放置方法除萃尖、茎段要正放(尖端向上)外，其他尚无统一要求。放置材料数量现在倾向少放，通过统计认为：对外植体每次接种以一支试管放一枚外植体为宜，这样可以节约培养基和人力，一旦培养物污染可以抛弃。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。并用棉塞塞好后，包上包口纸，包口纸里面也要过火。三角瓶每个瓶内放置3～5个外植体，其他程序同试管。如果以培养皿作为培养器皿，因选择培养皿大小不同，接种外植体数量有较大差异，以外植体间生长互不干扰为依锯。

(4)贴好写有接种植物名称、接种日期、处理方法等的标签。